小麦光腥黑粉菌tilletia foetida）aflp分析及其种的特异性scar标记的发掘.pdf

摘 要 小麦是世界各国主要粮食作物之一，是我国第二大粮食作物。小麦光腥黑穗病 (commonbuntofwheat)是小麦生产上的一种毁灭性病害。该病发生历史久远，分 布广泛，流行性强，危害严重。传统的病害诊断、检测方法主要是依据病原形态学、 生理学和病害症状特性，不但过程繁琐、时间周期长，而且准确性差、精度不高。因 此，研究开发快速、准确的病害分子诊断、检测技术，对于防止该病害的传播和蔓延， 确保我国小麦安全生产具有重要的理论意义和应用价值。 本项研究从美国及国内收集了小麦光腥黑粉菌5个菌株、小麦网腥黑粉菌3个菌 株和小麦矮腥黑粉菌、玉米丝黑穗菌、小麦散黑穗菌等小麦光腥黑粉菌部分近缘种的 冬孢子标样，分析比较了改良CTAB法、氯化苄法和SDS法从病原物冬孢子中提取基 病原菌微量冬孢子中成功提取基因组DNA。 本试验采用AFLP分子标记技术，通过对各种供试黑粉菌菌株的基因组DNA进行 酶切、连接、预扩增、选择性扩增和银染检测，共筛选了132对AFLP引物组合，获 得了其中一对引物组合(M。／E0。)，可扩增出小麦光腥黑粉病菌种的特异性条带。经多 次重复验证表明：该引物组合对所有供试的小麦光腥黑粉病菌5个菌株均可扩增出特 异性DNA片段，而在小麦网腥黑粉病菌、小麦矮腥黑粉病菌、玉米丝黑穗病菌和小麦 散黑穗病菌等近缘种中，则未扩增出该DNA片段。通过对该目的片断的回收、纯化、 Premier 7一 结果，用Primer 5．0软件分析其序列，并设计出一对特定引物(SC。：5 7)，用此引物对可定 对所有供试菌株的回检，结果表明，准确率达100％，此引物对可用作小麦光腥黑粉 病菌种的特异性SCAR标记。本实验结果为小麦光腥黑穗病分子检测技术体系的建立 奠定了基础。 关键词：小麦光腥黑穗病：DNA提取；AFLP；SCAR Abstract ofthemost inthe itismainfoodstuffinour wheatisone crops world，and important buntof Tilletia country．Commonwheat，causedby for and adestructivediseaseonwheat．Thetraditionalmethods Kuhn)，is diagnosis ofthediseasewas basedonthe detection mostly morphological testof the ofdiseaseinthe ina teliospores，andsymptom field，resultinglong germination andlow is to amolecularfor procedureaccuracy．So，itimperativedevelop assayrapid andaccuratedetectionofthisdisease． identification 5 isolatesofTilletia isolatesofTilletia foeti