小鼠卵巢组织玻化冷冻保存的研究.pdfVIP

中文摘要 卵巢是雌性哺乳动物生殖系统的重要组成部分。卵巢或卵巢组织冷冻保在物种保 存、人类医学、畜禽育种与繁殖等方面具有十分重的意义。对卵巢组织进行冷冻保存， 能够充分利用卵源，为体外受精、核移植和转基因等胚胎工程技术的研究和应用提供 充足的材料。本实验以五周龄昆明小白鼠的卵巢为材料，研究了冷冻保护剂、平衡时 间、冷冻载体和组织块大小对卵巢组织玻璃化冷冻效果的影响，解冻后收集组织中未 成熟卵，并进行体外培养和体外受精，以观察其体外成熟、体外受精及所形成胚胎的 发育能力，以期建立卵巢组织玻璃化冷冻保存的有效方法。 为了评价冷冻液和平衡时间对小鼠卵巢组织冷冻保存效果的影响，将卵巢组织 投入液氮进行冷冻，解冻，然后脱除冷冻保护剂，刺破卵泡，分离出卵母细胞进行培养， 成熟后进行体外受精，与不经冷冻的卵巢组织(对照组)直接分离出卵母细胞任体外 培养成熟后直接进行体外受精进行对比。结果发现，15％ED处理15min组成熟率和卵 小鼠卵巢组织玻璃化冷冻的效果优于PD冷冻保护剂。 采用半麦管、冻存管和离心管三种不同的冷冻载体开展小鼠卵巢组织冷冻保存。 结果发现，半麦管为载体冷冻保存的卵巢组织在解冻后分离的卵母细胞成熟率 心管的差异也达到显著水平(PO．05)；半麦管、冻存管和离心管为载体冷冻保存的 卵巢组织在解冻后分离的卵母细胞，经体外受精后的卵裂率分别为15．3％、16．9％和 1 明半麦管更适合用于小鼠卵巢组织的冷冻保存。 为了比较卵巢组织块大小对小鼠卵巢组织冷冻保存效果的影响，把卵巢组织切成 四块进行冷冻与整个卵巢组织冷冻后发现，卵巢组织切块分离出的卵母细胞成熟率和 说明分割卵巢组织块更适合于冷冻保存。 综合本实验的结果表明，小鼠卵巢组织玻璃化冷冻时，将卵巢切成四块，用半麦 管作为载体，7．5％ED平衡15min，15％ED的玻璃化冷冻液处理3min后，可以获得 较好的冷冻效果。 关键词：小鼠，卵巢组织，玻璃化冷冻 II Abstract isoneofthemost offemalemammals．Itisof Ovary importantreproductiveorgan to orovarian of greatpracticalsignificancecryopreserveovary tissuemammalfor domestic and animal and speciesprotection．medicine breeding of orovariantissueofmammalcouldmakefulluseofthe cryopreservationovary ovary resourcesfrom female could materialsfor mammals，which slaughtered provideoocyte basicresearchesand asinvitro biological practicleapplications，such transferand ovariantissuevitrification in transgenictechnique．Tooptimize procedures whichthekindof