棉铃虫bt毒素体蛋白—氨肽酶n1基因克隆及其在昆虫细胞系的表达.pdfVIP

摘 要 泛的基因。随着转Bt基因棉花种植面积的快速增长，转入的抗虫基因在棉花体内持续表达。使得 棉铃虫在整个生长周期都受到Bt杀虫蛋白的高压选择，存在产生抗性的风险，因此，棉铃虫的抗 性问题不容忽视。通过对棉铃虫对Bt产生抗性的机制的研究，可以为棉铃虫的抗性治理提供理论 指导，并为棉铃虫的防治提供新的思路。 的差异，并成功地将其在昆虫杆状病毒表达系统里进行表达。主要结果如下： 成的片段具有亲脂性和跨膜特性。 5A—G， 与棉铃虫对crylAc抗性存在潜在的密切关系。861异亮氨酸一苏氨酸，苏氨酸残基提供潜在的新 磷酸化位点，用于翻译后修饰，此位点突变会破坏它邻近的半胱氨酸残基形成二硫键能力，打破 受体的三级结构，可能导致抗性产生。 sDs．队GE分析和点杂交显示，目的基因得到了表达。这些结果将为分离、纯化受体蛋白，探索 受体蛋白与Bt毒素的相互作用提供基础，为进一步研究抗性机制奠定基础。 关键词 N)．受体，杆状病毒表达系统，表达 棉铃虫，氪肽酶N(Aminopeptidase Abstract oneofthe worldwjde 胁如。vP，P口口删船M(Hubner)isimportallt 89ricultIlralpests．曰∞肼淞 t0 insects 珐计嘲e琊捃(Bt)insectjcidalcrys诅lpmteins(IcP)havehi曲specialtyta唱et andnoharrnto its human relatedare tocontrolinsectthe livestock，so being柚d geneswildlyapplied pests．Asplanting has areaofBtcononbeen andthetransfomledinsecticidalincononare increasingrapidIy gene con“nuousl whole ofconon expressing yHd瑚f詈e阳gothi曲selectedpressureduring growingstage andtheresistancenskisunavoidable．Sotheresistanceof H口硎嘻 测中发现棉铃虫能够在c搿{Ac毒索的选择下存螽下来。2∞4年，j∞m∞￡掇遂粉绞瘦蛾 zm^∞船招nf在温室对Bt制荆产生抗性。室内筛选实验表明，多种昆虫可以对Bt杀虫剂和转 et穗I，1994)。平果斑螟c锄h∞船肠，马铃 Bt羹嚣端菇产生商度的抗性，包括日壤谷螟(op辨n 薯警囊三已蹦黼￡∞戳斑e删融d船(幻sav鑫班霜，2酗2)，兹美耪时举国删如艄审赫耪绽夜 etaI，1995)，欧洲玉米螟蕊护m埘 蛾，甜菜夜蛾嘞咄Pf8m“姆蚪，烟芽夜蛾肫，fD腩坫v抛s卯m(Lee 删6妇船，致倦席蚊cⅣh et g“旧醒细c抽f酣和棉铃虫(粱萆梅，2000：Akhu髂taI．2003)等。 许多学者曾从生物化学、分子生物学、组织病理学簿方面研究了Bt毒素的作用机制(schnepe et et al，1998；whalona