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植原体侵染对泡组培苗酶的影响及相关基因片段克隆研究
中文摘要
本试验分为三部分,第一部分是外施药剂对泡桐病健组培苗过氧化物酶
(POD)和吲哚乙酸氧化酶(IAAO)活性的影响,第二部分是与植原体侵染相关
的酶蛋白纯化,第三部分是与植原体侵染相关的POD基因片断克隆。
泡桐无性系病健组培苗,结果表明,NAA处理后,在第一周适宜的浓度可以降低
因损伤引起POD活性升高的代谢反应,在第二和第四周,POD活性升高总体上随
着药剂浓度的升高而升高,而对于IAAO的活性变化两无性系间的变化趋势差异
较大,NAA处理后植株的生根能力增强,对生长有一定的促进作用;6一BA处理
后,POD和IAAO的活性在各周次的测定中都出现活性下降,在形态上健康苗出
现类似病苗的症状,病苗的症状加重;SA处理后病健苗都出现POD活性升高,
I从O活性下降,在处理浓度范围内,SA的加入抑制了健康菌的生长,促进了病
苗的生长;在提取酶液时加入PVP-P除去酚类物质,POD的活性明显上升,IAAO
的活性略有下降,酚类物质可以抑制POD的活性,提高IAAO的活性。
运用泡桐病健组培苗进行酶蛋白的抽提,酶的纯化过程包括匀浆、(NH。)。sO。
沉淀、阴离子DEAE--sephadexA50和阳离子CM一52交换层析,纯化和鉴定了一
种在病苗中表达量特异性升高的POD,对该酶进行高效液相色谱分析可知,该酶
的纯度已达到99%以上,比活力达到371U/mg。
对泡桐病健组培苗对照进行POD酶基因诱导表达的研究,通过分子生物学的
方法,从病苗中克隆出一段长度为871bp的POD酶基因片断,而健康苗中则没有
表达。该序列是一段不含有内含子的3’末端编码序列,编码一段长度为219个
氨基酸残基、分予量为24074的肽段,该片断可能与植原体侵染后POD活性表达
升高有关。
关键词: 植原体泡桐丛枝病过氧化物酶吲哚乙酸氧化酶基因克隆
蛋白纯化
Abstract
the
three first isabout
This comprisesparts.Thepart
paper
of PODandIAAOexterior
onactivities by
influences plantlet’s
paulownia
isabout of relatedtothe
second enzyme
reagents.Thepart purification
witch’s thirdisabout
of part
infection broom—phytoplasma.The
paulowina
infectionof
tothe
of related
clonePOD paulowina
the genefragment
witch’s
broom-phytoplasma.
exterior
weretreated
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