猪体细胞克隆胚着床前发育期间h3k27乙酰化重编程规律研究.pdfVIP

Anhui Agricultural University Master Degree Thesis Reprogramming Dynamics of Histone H3 Lysine 27 Acetylation During Pre-implantation Development of Pig Somatic Cloned Embryos Postgraduate candidate: Zhou Naru Academic supervisor: Prof. Zhang Yunhai Co-supervisor: Prof. Zhang Xiaorong College of Animal Scienceand Technology, Anhui Agricultural University,Hefei, 230036 Hefei, Anhui, China June, 2013 本研究受下列项目资助 1. 国家自然科学基金项目 2. 国家重点基础研究发展计划项目(2009CB941004 和20 11CBA 01001) SUPPOTED BY 1. National Natural Scientific Foundation of China (No.312724 42) 2. The National Basic Research Program (No. 2009CB941004 and No. 20 11CBA01001) 摘 要 体细胞克隆技术为创制抗病、产品品质提升、节粮和环保等目标性状改良的转基 因猪育种新材料提供了可能，也有助于拓展以猪为模型，开展人类相关疾病研究，尤 其是与转基因、干细胞等生物技术结合，有望建立猪源生物反应器以生产药物蛋白、 为人类器官移植开辟异源供体以及生物学机理研究等提供革命性的手段。目前克隆效 率依然低下，其最根本原因是表观重编程不彻底。表观遗传修饰主要包括DNA 甲基 化/去甲基化、组蛋白修饰（如乙酰化/去乙酰化、甲基化/去甲基化、SUMO 化、磷酸 化等）等。其中组蛋白是染色体上核小体的核心，其物理学和化学修饰的变化都会影 响相应区域的基因表达，从而参与调控真核细胞的生长和发育，但目前对组蛋白修饰， 尤其是乙酰化修饰是否参与猪胚胎着床前期发育的研究极少。故本研究拟以H3K27ac 为对象，检测H3K27ac 在体外受精胚 （In vitro fertilization embyo ，IVFE）、体细胞 克隆胚 （Nuclear transfer embryo，NTE ）以及孤雌激活胚（Parthenogenetic activation embryo，PAE ）等不同类型猪着床前胚胎不同发育阶段的表达量，进而揭示同一类型 胚胎整个着床前发育阶段的动态变化规律，通过比较不同类型胚胎的变化趋势，关联 胚胎发育命运，为揭示H3K27ac 在猪NTE 早期发育期间的作用机制奠定基础。 试验一：旨在揭示猪胚胎着床前发育期间 H3K27ac 的动态变化谱。首先，对 H3K27ac 抗体特异性进行了检测。用竞争性免疫多肽在猪孤雌囊胚上做验证，结果显 示没有H3K27ac 信号，表明本文所用抗体H3K27ac 是特异性的。我们检测了H3K27ac 在NTE 和PAE 激活后第15min、30min 和1h 的表达，根据NTE 的H3K27ac 水平， 追踪这一修饰的源头；进而以IVFE 为参照，重点分析了猪NTE 在 2hpa、6hpa 、12hpa、 14hpa、16hpa、1cell、2cell、4cell、8cell、morula 、EB、EXPB 和HB 时期的H3K27ac 表达水平。