芽孢杆菌m-2β-甘露聚糖酶的产生、纯化与性质研究.pdfVIP

芽孢杆菌M-21争甘露聚糖酶的 产生、纯化与性质研究 摘要 争甘露聚糖酶是一类能够水解甘露聚糖、葡甘露聚糖、半乳甘露聚糖的生 物活性酶。在食品、医药、饲料、造纸、石油等方面已得到广泛应用；近年来， 它在降解植物胶生产功能性甘露低聚糖以及作为食品和饲料添加剂等方面倍受 关注。 本研究从土壤中分离、选育出弘甘露聚糖酶产生菌株，对其进行初步鉴定， 考查了不同因素对菌株发酵产酶的影响，对酶进行了分离纯化与性质研究，并 用此酶降解制备甘露低聚糖，对甘露低聚糖进行了分离纯化和结构分析鉴定。 主要研究成果如下： (1)通过富集培养、分离纯化、选择性平板分离、平板水解圈初筛和摇瓶 复筛，从土壤中筛选出一株具较高产p甘露聚糖酶能力的菌株(编号为M-21)， 经初步鉴定为芽孢杆菌属(Bacillussp．)。 (2)通过单因素实验和正交优化实验，确定了Bacillussp．M-21最佳发酵产 酶条件。菌株的产酶最适培养基组成包括(g／L)碳源：瓜尔豆胶4，复合氮源： 5，其他无机盐组分：K2I-IP04·3H20 0．5、 豆粉20、(NH4hHP04 l、MgS04·7H20 8．0， r／rain振荡培养36h。此 接种量4％，装液量50mL／250mL三角瓶，32℃180 U／mL。 条件下酶活力最高可达1487 (3)Bacillus kDa。相比之下， 子交换柱后分离纯化，SDS．PAGE电泳确定酶的分子量为33．4 此p．甘露聚糖酶的分离步骤简单，酶的比活力和回收率(70．1％)都很高，具有工 业上大量制备的前提。 (4)此p-甘露聚糖酶最适反应的pH为7．0，且耐受的pn范围较宽(5．0—11．o)， 具有一定的耐碱性；最适反应温度为5012，50C以下酶活力稳定。金属离子 Fe2+、cu2+、H矿、Ag+有对酶有抑制作用。酶对魔芋胶、刺槐豆胶和瓜尔豆胶 Vanol／(min-mE)。菌株M-21所分泌的p甘露聚糖酶的最适底物为魔芋胶。 (5)酶降解魔芋胶、刺槐豆胶、瓜尔豆胶制备甘露低聚糖，通过乙醇分级 Extra P-4 沉淀、凝胶过滤层析(Bio-Gel Fine)对寡糖进行分离纯化，经TLC、质 谱分析，魔芋胶酶解产物由二糖、三糖、四糖等一系列寡糖片段组成，单糖很 少。 本研究为B一甘露聚糖酶的工业化生产和甘露低聚糖的酶法制备提供了一定 的理论和实践依据。 关键词：B-甘露聚糖酶，芽孢杆菌，发酵条件，甘露低聚糖 Ⅱ Studiesonthe and Production，Purification Bacillus Characterizationof from p-mannanase sp．M-21 Abstract isanenzyme of 肛m舡m触ase capablehydrolyzingp一1，4一D—manno-pyanosyl withmain has ofmannans linkages product widecommerc