黄曲霉毒素bt;,1gt;单抗的制备及初步应用.pdfVIP

中文摘要 中文摘要 黄曲霉毒素Bl常会污染植物和动物源性食品，被动物摄入体内后，还可转化 成毒性也较大的黄曲霉毒素Ml等衍生物。黄曲霉毒素Bl具有致癌、致畸、致突 变作用，对人类健康构成巨大的威胁。加强对黄曲霉毒素Bl的检测，对确保食品 安全具有重要意义。 黄曲霉毒素Bl的检测方法主要有薄层层析法、高效液相色谱法及免疫学方法 等。薄层层析法灵敏度不高，特异性不强，易被其它荧光物质干扰，且分析时间 较长；高效液楣色谱法虽然灵敏度高，但检测仪器化程度高、设备昂贵，操作技 术要求高，前处理净化要求高；免疫学方法由于其特异性强、灵敏度商，前处理 简单，操作简便，比较容易推广使用。酶联免疫吸附法可同时检测多个样品，特 异性强、灵敏度高、，速度快，是一个准确性、安全性高，实用性强的检测技术。 玉米是我国较为常用的动物饲料来源，园玉米发霉导致动物黄曲霉毒素急、 。慢性中毒的病例屡见不鲜。本研究运用化学合成方法制备AFBl完全抗原，采用单 克隆抗体技术制备灵敏度高、特异性强、效价高的抗体，建立了ELISA测定方法。 采集玉米样品，进行加标回收试验，优化玉米样品中AFBl的提取净化方法，最终 建立稳定、可靠的检测玉米中AFB-的方法。 测，用紫外扫描法鉴定每步反应的合成效果，并根据扫描结果计算载体蛋白与毒 利用率较高，分别达到84．3％和55．4％。 单克隆抗体技术筛选，获得8株可持续分泌针对AFBl抗体的杂交瘤细胞株，分别 明，经体外连续传代培养30代和在液氮中冻存180d复苏后，培养上清中抗体的 效价基本保持不变。 用2％OVA，37℃下封闭2h。 中文摘要 n 低于0．5ng／ral，LOQ为0．55ng／ml。 对玉米样品中的AFBl提取方法进行了优化，使提取液对ELISA检测的干扰 做加标回收试验，经检测AFBl回收率在83．7％～127％之间，平行样品之间的重复 为0．2-10ng／nll，其LOD为o．2pg／kg。 关键词：黄曲霉毒素BI；单克隆抗体：ELISA；玉米；检测 英文摘要 ABSTRACT AflatoxinBl contaminatesfoods animals，aswellas widesprcadly preparedby once to animals，itwillconvertsomeothertoxic plants，andingestedby derivants， suchas aflatoxinM1．AflatoxinB1is and cancerigeuic，teratogenic is threattOhumans’health．Soitis for food to great veryimportantensuringsafety illllance thedetection ofAFBI． There黜severalmethodstodetectthecontentof Thin AFBl， includingLayer Performance