鼠李糖乳杆菌l-22株的选育和培养条件优化及免疫功能的研究.pdfVIP

鼠李糖乳杆菌L3—22株的选育和培养 条件优化及免疫功能的研究 摘 要 物质、代谢产物的抑菌活性、细胞破碎方法及小鼠免疫功能进行了研究，为该菌微生 态制剂的研制开发奠定基础。 本文用牛津杯双层平板定量扩散法、酸度计测培养物pH值法及菌体干重法，对9 种13株乳酸菌抑菌活性、抑菌范围、产酸能力及生长速度进行测定；用紫外线照射 进行诱变，筛选正向突变菌株。采用测定LRL3—22株培养物的生物量及酸度的方法， 对培养基的成分和起始pH值、培养温度、时间、方式及接种量进行优化，并绘制发 酵增殖曲线。 用牛津杯双层平板定量扩散法对LRL3—22株代谢产物进行体外抑菌试验。通过测 定破碎液的A6。、A。、A。onm值来反映细胞的破碎程度和胞内蛋白及核酸物质的释放 情况来比较超声波破碎法、反复冻融法及高速匀浆法的细胞破碎效果及优缺点。用最 小二乘法绘制标准曲线得出LRL3-22株培养物的乳酸和肽聚糖产量；用试管稀释法测 出LRL3—22株代谢产物的最小抑菌稀释度(MIC)和最小杀菌稀释度(MBC)。 用健康小鼠80只作为试验动物，对照组为灭菌水；试验1组为自制发酵培养基， 108个／111L； 0．5mL／只／d，连续13d：通过测定小鼠巨噬细胞的吞噬活性和T淋巴细胞数量及抗体、 血清溶血素、器官指数的变化来反映LRL3—22株培养物对小鼠免疫功能的影响。 试验结果表明： 1．从9种13株乳酸菌中筛选出一株抑菌活性高、抑菌范围广、产酸能力强及生 长速度快的乳酸菌，即鼠李糖乳杆菌L3株。通过紫外线照射其诱变，最终获得～株 抑菌活性比出发菌提高11．74％，且活性稳定的LRL3—22株。 的复合无机盐成分；优化的培养条件是：培养基pH自然，26～37C静止培养48h， 接种量2％；发酵增殖曲线呈近“s”形，生物量与产酸量正相关，培养36h时，生物 量达最大值1．409：36h时，pH值最低3．79。 复冻融法的最佳次数是5次；高速匀浆法的最佳量程为8×2800；以反复冻融法简单 易行，效果也比较理想。 4．LRL3—22株代谢产物有较强的抑菌活性。该活性热稳定性好，能耐受100。C的 温度，不受过氧化氢酶、蛋白酶K、木瓜蛋白酶和胰蛋白酶的影响；但受pH值的影 响较大，随着pH值的升高抑菌活性逐渐降低，在弱酸、中性和碱性条件下将失去抑 菌活性。 糖胺含量为0．0003 肽聚糖含量为0．51mg／mE，葡萄糖胺含量为0．0076 mg／mL， 培养物的MIC为0．0625mg／mL，MBC为0．125mg／mL；培养72h，MIC为0．03125 MBC为0．0625 mg／mL。 6．LRL3—22株培养物能激活小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬活性，明显促进其吞噬作 用；可使T淋巴细胞数量比对照组多4．28％，抗体积数比对照组多45．1％，并能提 高小鼠血清IgM水平及胸腺指数和脾脏指数。 本研究筛选出了一株有益乳杆菌，即鼠李糖乳杆菌L3—22株，并优化出了培养基 组分和培养条件。该菌株产酸能力强，生长速度快，可提高小鼠免疫功能，其代谢产 物抑菌活性强、范围广、性质稳定，是理想的益生素生产菌株。 关键词：鼠李糖乳杆菌，选育，培养条件，代谢产物，免疫功能，细胞破碎 II on Selectionand ofCultivation Study Optimization and ConditionofLactobacillusrhamnosusL3．22 its Function Immunological Abstract