C V 从0.5mL样本中人工提纯DNA的实验方案.pdf

从0.5mL样本中人工提纯DNA的实验方案 用于从 Oragene® 和 ORAcollect® 系列采集工具中提纯基因组 DNA 。 如需其他语言和方案，请访问我们的网站： 。 以下步骤方案描述了如何从500µL测试样本提纯DNA 。 所用试剂 • prepIT®•L2P （目录号：PT-L2P） 设备和试剂 • 转速可达到 15,000 × g 的微离心机 • 1.5mL 微管（如： Axygen #MCT-150-C） • 温度为50°C的空气培养箱或隔水式培养箱 • 处于室温的乙醇（浓度为95%到100%） • 处于室温的乙醇（浓度为70% ） • DNA缓冲液：TE （10 mM Tris-HCl，1 mM EDTA，pH 8.0）或类似溶液 步骤 提纯步骤 说明 1. 将DNA Genotek工具包中的样本倒转并轻轻摇 • 这是为了确保粘性样本混合均匀。 晃几秒，使其混合。 2. 将样本在50°C 的隔水式培养箱中培养至少1个 • 此热处理步骤对于确保充分释放DNA并永久灭活 小时，或者在50°C 的空气培养箱中培养至少 核酸酶非常重要。 2个小时。 • 这一培养步骤可在样本收集之后和提纯之前随时 进行。 说明：使用空气培养箱可能更好，因为样本管在水 • 为确保样本的均匀性，必须在等分样本之前在原 浴槽中可能会漂浮。如果必须使用水浴槽，就要确 来的采集管中培养整个样本。 保试管中装有样本的部分浸在水中。 • 样本可在50°C 的温度下通宵培养，如果这样做更 为方便的话。 • 在空气培养箱中进行培养需要更长的时间，因为 与隔水式培养箱相比，其温度平衡更慢。 3. 将混合后的500µL样本转移到1.5mL的微量离心 • 剩余样本可在室温或冷冻（-15°C 到 -20°C ） 管中。 环境中进行储存 4. 将20µL (1/25 的量) 的PT-L2P添加到装有500µL样本 • 当杂质和抑制剂沉淀时，样本会变浑浊。 的微量离心管中，并旋转几秒钟，使其混合。 5. 在冰上培养10分钟。 • 可用室温培养代替之，但是消除杂质的效果会 略差。 6. 室温下离心5分钟，转速为15,000 × g 。 • 较长时间的离心（多达15分钟）有利于减少最 终DNA溶液的浑浊度(高 A320)。 C V PD-PR-00231 (ZH - Chinese) Issue 1/2012-04 © 2012 DNA Genotek Inc.—OraSure Technologies, Inc. 子公司，保留所有权利。 • support@ 提纯步骤 说明 7. 用移液管吸头小心地将干净的上清液转移到新 • 团粒含有浑浊的杂质。如果不小心碰到团粒，就 的微量离心管中。丢弃含有杂质的团粒。 必须将微量离心管重新离心。 8. 在500μL 的上清液中加入室温下浓度为95%至 • 根据样本中的DNA含量，在与乙醇混合的过程 100%的