实验四土壤中酚的转化强度资料.pptVIP

实验四 土壤中酚的转化强度 一、实验原理 在有生产力的土壤中存在大量活跃的微生物和原生动物等。在这些微型生物的生命活动中存在着对生命活动有很大影响的代谢过程。代谢过程通常包含两个既独立又相互依存的过程，即合成代谢和分解代谢。生物有机体通过这两个过程的交互进行，引起物质的降解，营养物质的吸收，能量的转化以及各种生物代谢产物的合成来维持生命活动。 由环境污染排入土壤中的酚类物质或生物降解过程中产生的酚类物质，在土壤微生物作用下，最终都可通过生命的代谢过程转化成二氧化碳和水。 土壤中的酚类物质除降解转化外，有一部分通过蒸发逸入大气，另一部分则通过吸附作用被土壤截留。 影响土壤中酚转化强度的因素有微生物数量和活性、土壤特性、环境温度等。本实验以灭菌后的土壤作为对照，确定新鲜土壤中的酚的转化强度。土壤中酚用蒸馏水提取后用比色法测定。 二、实验目的 1、确立有机物在土壤中降解转化概念。 2、测定酚在土壤中的转化强度。 三、仪器与试剂 721（或72）型分光光度计 振荡器一台 生化培养箱 土壤筛 2mm孔径 高压锅 1.5kgf/cm2 分析天平一台 比色管 50毫升 锥形瓶 250毫升 100毫升 移液管 1毫升 10毫升 离心管 50毫升 容量瓶 100毫升 量筒 50毫升 漏斗 培养皿 ?3~5cm 灭菌水：取蒸馏水在压力锅内灭菌制得。 缓冲液：称20克氯化铵溶在100毫升浓氨水中，其pH值为9.8。 显色剂：称4克4-氨基安替比林，溶在100毫升蒸馏水中，贮于棕色瓶内，保存于冰箱中。 铁氰化钾溶液：称8克铁氰化钾，溶于100毫升蒸馏水中，贮于棕色瓶内，保存于冰箱中。 苯酚精制：将苯酚置于50~70℃热水中熔化，小心移入蒸馏瓶中。瓶塞用包有铝箔的软木塞，其中插有一支250℃温度计。蒸馏瓶的支管与空气冷凝管连接，用25毫升干燥磨口锥形瓶作接收器，在通风柜内用电炉小心加热蒸馏，弃去开始带色馏出物，收集182~148℃无色馏出物，密封于暗处保存。 0.1NKBr KBrO3溶液：称0.696克溴酸钾，加2.5克溴化钾，用蒸馏水溶解后定容到250毫升。 重铬酸钾溶液0.0250N。 硫代硫酸钠溶液：0.0250N。 淀粉液：1%水溶液（W/N）。 氢氧化铝凝胶：称12.5克硫酸铝钾，溶在100毫升水中，加热到60℃左右，徐徐加入5.5毫升浓氨水，充分搅拌后静置沉降。倒出上层清液，再加阿30毫升蒸馏水，使用前摇匀。 苯酚储备液：称0.5克左右精制后的苯酚，溶在100毫升灭菌水中。 苯酚标准储备液：移取20毫升苯酚储备液到100毫升容量瓶内，用灭菌水定容，按下法标定其准确浓度。 取一个250毫升碘瓶，加入1克碘化钾，50毫升水，20毫升0.0250NK2Cr2O7溶液，5毫升6N硫酸，于暗处置放5分钟。用硫代硫酸钠溶液滴定到淡黄色，加1毫升淀粉液，继续用硫代硫酸钠溶液滴定到蓝色刚好褪去，记上耗去硫代硫酸钠体积V，则硫代硫酸钠溶液浓度为： 式中：N为硫代硫酸钠标准溶液的当量浓度； V1为空白滴定时硫代硫酸钠标准溶液用量（毫升）； V2为滴定酚标准储备液时硫代硫酸钠标准溶液用量（毫升）； 15.68为苯酚的当量。 苯酚标准液：取以标定浓度的酚标准储备液若干毫升，放入1000毫升容量瓶内，使其定容后浓度为0.020mg/ml。 四、实验过程 1、找一块干湿适宜的土地，刮去1-2厘米厚的表土，取深度为2-8厘米的土壤200克左右，放入瓷盘中，混匀后用2mm孔径土壤筛筛出备用。 2、取一个干净的培养皿，称出重量（称准到0.002克）。再加入10克左右土壤，再称出重量，然后放入105℃烘箱内烘至恒重后放入干燥器内，冷却后再称重。计算湿土壤含水率。 表一： 3、取4个250毫升锥形瓶，往其中两个瓶内各放入20克过筛后的土壤（称准到0.002克，以下同），作为对照试样。4个瓶均放入压力锅内在1kgf/cm2压力下灭菌20分钟。到时取出锥形瓶，冷却后往两个空锥形瓶中各加入20克土壤，作为样品培养土，各瓶做好标记，摇匀4个瓶内的土壤使它们摇匀平铺在瓶底上。移出1.00毫升苯酚储备液，逐滴分散的滴在土壤上。4瓶土壤都滴完酚后，灭菌水各加20ml（冷却后），瓶口包上两层纱布，放在30℃培养箱中培养48小时。 4、培养完毕各加入40毫升蒸馏水，振荡20分钟。振完将混合物倒入50毫升离心管中，以每分钟3000转的转离速离心5分钟。上层溶液倒入100毫升容量瓶内，再用4