常用分析化学技术 色谱法详解.pptVIP

1906年，俄国植物学家 茨维特发表了他的实验结果：为了分离植物色素，他将含有植物色素的石油醚提取液倒入装有碳酸钙粉末的玻璃管中，并用石油醚自上而下淋洗。 1.色谱分离过程 组分在色谱分离过程中有两种行为： a.保留作用：与固定相作用，被固定相作用。 b.迁移作用: 溶解在流动相中，随流动相移动。 不同的组分，由于组成、结构和性质的不同，与固定相作用能力不同，在流动相中的溶解度不同，移动速度不同： 与固定相作用能力强，在流动相中的溶解度小的组分，移动速度慢： 反之，与固定相作用能力弱，在流动相中的溶解度大的组分，移动速度快。 将小差异累积数千乃至数百万次，产生大差异，从而将各组分分离。 组分的结构和性质微小差异 与固定相作用有微小差异 随流动相移动的速度不同 差速迁移 将小差异重复多次 产生大差异 色谱分离。 （1）按两相分子的聚集状态分类 （2） 按固定相的固定方式分类 阳离子交换剂:对阳离子具有交换能力。 阴离子交换剂:对阴离子具有交换能力。 b. 点样 先用铅笔在距薄层板一端1cm处轻轻划一横线作为起始线，然后用毛细管吸取样品，在起始线上小心点样，斑点直径一般不超过2mm。 若因样品溶液太稀，可重复点样，但应待前次点样的溶剂挥发后方可重新点样，以防样点过大，造成拖尾、扩散等现象，而影响分离效果。点样要轻，不可刺破薄层。 c.展开 薄层色谱的展开，需要在密闭容器中进行。 在层析缸中加入配好的展开溶剂，使其高度不超过1cm。 将点好的薄层板小心放入层析缸中。点样一端朝下，浸入展开剂中。盖好瓶盖，观察展开剂前沿上升到一定高度时取出， 在板上标上展开剂前沿位置。晾干，观察斑点位置。 d.显色 当组分无色时，需喷洒显色剂使斑点显色。 对于含有荧光剂的薄层板在紫外光下观察，展开后的有机化合物在亮的荧光背景上呈有色斑点。 这些吸附水就构成了色谱过程的固定相，展开剂(与水不相混溶的有机溶剂)为流动相，滤纸只起到支持固定相的作用。 当样品点在滤纸一端，放在一密闭器中，让流动相通过毛细管作用从滤纸一端，经过点样点流向另一端，样品中溶质在固定相水、流动相有机溶剂中进行分配。 易溶于有机溶剂而难溶于水的组份，随流动相往前移动速度快些，而易溶于水，难溶于有机溶剂的组份，随流动相向前移动速度慢些，从而达到将不同组份分离的目的。 自来水流经H型阳离子交换树脂柱时，水中Na+、Ca2+、Mg2+等被阳离子交换树脂交换吸附发生如下反应： 　　 2RH + Mg2+ R2Mg + 2H+ 由交换柱底部流出的水，Ca2+、Mg2+含量显著减少。 水中还含有阴离子，如Cl-、SO42-、CO32- 等需经过阴离子交换树脂柱而除去。 阴离子交换树脂是一类含有季胺基（N-Cl）等碱性基团的高分子固态珠状物，以R－Cl表示。它经NaOH，转为羟型（R－OH）后，能与阴离子发生如下交换反应: 2ROH + SO42- R2SO4 + 2OH- 经过阴、阳离子交换柱以后的水，杂质阴、阳离子均已除去，故称去离子水。 示差折光检测器是根据不同物质具有不同折射率来进行组分检测的。 光通过仅有流动相的参比池时，由于流动相组成不变，故其折射率是固定的；光通过工作池时，由于存在待测组分而使折射率改变，从而引起光强度的变化，测量光强度的变化，即可测出该组分浓度的变化。  荧光检测器适合于稠环芳烃、氨基酸、胺类、维生素、蛋白质等荧光物质的测定。 荧光物质的分子或原子经光照射后，有些电子被激发至较高的能级，这些电子从高能级跃至低能级时，物质会发出比入射光波长较 长的光，这种光称为荧光。 在其他条件一定的情况下，荧光强度与物质的浓度成正比。在紫外光激发下，荧光物质产生荧光，由光电倍增管转变为电信号。 四、色谱应用 色谱法的应用，可以根据目的分为分离分析性色谱和制备性色谱两大类 。 分离分析性色谱的目的是分离混合物中各组分，对组分进行定性或者定量测定。 色谱法应用于分析领域使得分离和测定的过程合二为一，降低了混合物分析的难度，缩短了分析的周期。 在中华人民共和国药典中，共有超过600种化学合成药和超过400种中药的质量控制应用色