2012~203年黑龙江省猪流行性腹泻病毒主要结构基因的遗传变异分析.pdfVIP

目录 目 录 中文摘要……………………………………………………………………………………I 英文摘要…………………………………………………………………………………．III 1前言………………………………………………………………………………………l 1．1猪流行性腹泻的概述………………………………………………………………一l 1．2PEDV的生物学特征…………………………………………………………………l 1．2．1 PEDV的分类地位及生物学特征………………………………………………．．1 1．2．2 PEDV基因组及其各段编码蛋白功能……………………………………………2 1．3猪流行性腹泻病毒体内外感染的特性………………………………………………4 1．3．1体内致病性………………………………………………………………………4 1．3．2体外培养特征……………………………………………………………………5 1．4PED免疫学研究概况…………………………………………………………………5 1．4．1PEDV感染仔猪后的免疫反应……………………………………………………5 1．4．2PEDV感染后的抗体产生及其保护作用…………………………………………5 1．4．3 PED的疫苗研究…………………………………………………………………6 1．5PED诊断方法的研究进展……………………………………………………………7 1．5．1免疫电镜法………………………………………………………………………7 1．5．2免疫荧光法………………………………………………………………………7 1．5．3微量血清中和试验………………………………………………………………7 1．5．4 ELISA法…………………………………………………………………………………………………7 1．5．5 ImPCR法………………………………………………………………………………………………．8 1．6本研究的目的与意义……………………………………………………………………8 2材料及方法………………………………………………………………………………9 2．1实验材料……………………………………………………………………………．．9 2．1．1猪小肠和粪便病料………………………………………………………………9 2．1．2身H胞与病毒………………………………………………………………………．．9 2．1．3菌种…………………………………………………………………………………9 2．1．4实验动物…………………………………………………………………………9 2．1．5引物………………………………………………………………………………………………………．9 0 2．1．6细胞培养液及分子生物学试剂…………………………………………………l 2．1．7主要仪器设备……………………………………………………………………10 2．1．8试验用缓冲液及培养基………………………………………………………一ll 2．2实验方法……………………………………………………………………………12 2．2．1PEDV序列的测定………………………………………………………………12 2．2．2PEDV HLJ．2012株兔源抗体对LJB／03株的中和试验…………………………14 2．2．3PEDV HLJ．2012株的分离培养…………………………………………………15 东北农业大学农学硕士学位论文 8 3结果与分析……………………………………………………………………………………．1 3．1PEDV流行毒株S基凶Sl区的扩增………………………………………………18 3．2病毒S基凶s1区的克隆和序列分析……………………………………………