乳糖酶基因在毕酵母中的表达鉴定、发酵工艺优化及发酵液后处理的研究.pdfVIP

摘 要 3．2．1．23) 13-D．半乳糖苷半乳糖水解酶(B．D—galactosidegalactohydrolase,EC 通常被称为乳糖酶①actase)。该酶可将乳糖水解成为半乳糖与葡萄糖，同时也具有 半乳糖苷的转移作用。B．半乳糖苷酶主要应用在生产低乳糖乳制品以及缓解绝大多 数亚洲人食用乳制品时造成的乳糖吸收不良和乳糖不耐受的问题。但目前在我国乳 糖酶的应用还未得到广泛推广，主要原因就是乳糖酶产量低，销售价格过高，应用 成本昂贵，不能满足食品和乳制品工业的需要。而基因工程技术的发展，为研制出 产量高、酶学性质优良、工艺简便、成本低、更适合食品工业生产的乳糖酶提供了 有效的途径。 本试验利用基因工程技术，构建真核表达载体ppIC9．cDNA，并且利用毕赤酵母 表达系统成功的高效分泌表达了来源于亮白曲霉的乳糖酶，表达量达6s：L。在此基 础上对高表达菌株的插入位点进行了鉴定，结果显示1’、7。初步认为整合方式相同， 并且与25。整合方式不同，这为寻找高表达的菌株与插入位点之间的关系，为获得高 表达菌株奠定理论基础。 同时在小试水平对乳糖酶的发酵工艺进行了研究和优化，成功的摸索出乳糖酶 量由DO控制，诱导方式首先采取了葡萄糖一甲醇混合物进行过渡期，随后是甲醇诱导 的方式，这将为乳糖酶大规模工业化生产提供借鉴。最后，根据乳糖酶发酵液中颜 色较深，盐浓度高等特点和后期纯化工艺的要求，选择了膜分离技术来处理发酵液， 其中主要从微滤提取、超滤浓缩两步操作过程对酶活性的影响进行了研究，就超滤 而言，温度25℃，操作压力小于0．12MPa，浓缩倍数lO倍时，酶活损失最少，膜最容 易清洗。 关键词：乳糖酶；巴斯德毕赤酵母；聚合酶链式反应；Southern印迹杂交；发酵； 膜技术 and ofLacinPichiaPastorisandStudies ExpressionIdentify onits Fermentation andthe StrategyOptimization DownstreamProcessofFermentation liquors ^bstract 3,2．1．23)isnamedlactasewhichCall p-D-galaetosidegalactohydrolase伍Cusually lactoseinto and alsocantransfer is hydrolyze galactosegluco∞，and galactoside．Lactage usedin lowlactose lactage usedfor mainly producing dairy c蛆be products，also treatmentof“lactoseintolerance’．Main oflactase arelow problems productionyield， andnarrow ofthe high-cost appnedrange．Thedevelopmentgeneticengineering technologyeffective for supplies approachproducinghi