利用安全选择标系统进行枫香耐盐转基因研究.pdfVIP

摘要 土壤盐溃化是一个世界性问题。在盐碱地上植树造林不仅可以改善生态环境，而且 可以带来一定的经济效益，因此，耐盐树种的选育是林木育种工作者的当务之急。基因 工程技术打破了常规育种的局限性，可直接将外源耐盐基因导入林木从而获得耐盐新品 种，加速育种进程。但转基因植株中选择标记基因安全性己引发了广泛的争议。本研宄 运用了双效安全的选择系统对枫香进行耐盐转化，主要取得了以下三个方面的实验结果： (1)构建了双T-DNA表达我体pCAMBIl301．NHX。 这是首次将耐盐基因和甘露糖安全选择标记基因构建到同一个植物表达载体上，并且这 两个基因分别位于载体的两个独立的T-DNA区，通过农杆菌介导植物转化该表达载体， 可以获得含安全选择标记基因的To代转化植株，选择标记基因和目的基因可以在转基因 植株自交后代中分离，期望在Tl代筛选到只含有AtNHXI基因的MFTP。 (2)首次建立了枫香甘露糖筛选体系。 通过甘露糖敏感性测验结果发现，随甘露糖浓度增加，枫香不定芽分化率降低，说 明枫香可以利用甘露糖对转基因植株进行筛选；受体叶片与农杆菌共培养后，在含不同 浓度的甘露糖和蔗糖的分化培养基上进行分化，不定芽经PCR检测结果显示，在含】59／l 甘露糖和10∥l蔗糖的培养基上分化的不定芽阳性率为82士15．7％，每个分化叶片平均可诱 导出7．7i3，8个阳性芽，转化效率最高，因此确定该浓度组合为枫香甘露糖筛选体系的 选择压。 (3)利用甘露糖筛选体系转化获得一批转基因枫香植株。 以枫香叶片为受体材料，通过根癌农杆菌介导转化和甘露糖筛选，获得的转化植株 枫香体中表达。 关键词：中国枫香，6．磷酸甘露糖异构酶基因．AtNHXI基因．双T-DNA， Abstract Soil isaserious not worldwide．Treecall entironmentbut salinity problem onlyimprove also witheconomicbenefits．So varietieswith salttoleranceis bring breeding high urgent affairstous．Genetic breaks thelimitationsofconventional methods， engineering breeding which Calltransfersalt-tolerance intotree and forest genedirectly organismimprove breeding the selectabe a of markerhascaused concem．In progress．Butsafety gene widespreadpulie this selectionwasusedforsalt—tolerance study，apositive system transformationofChineses threeresultswereobtainedasfollow：