小鼠发育不同阶胚胎冷冻保存的研究.pdfVIP

东北农业大学兽医专业硕士学位论文 摘 要 哺乳动物胚胎冷冻保存技术的应用促进了胚胎生物工程的发展。近年来胚胎冷冻保存 技术已取得长足的进展，但还存在很多问题没有解决。尽管在冷冻前对胚胎进行了严格的 选择和处理．但是因所用冷冻保护液的不同、冷冻方法的差异，而使冻胚的解冻方法、培 养或移植后的发育率又各不相同。本实验应用乙二醇(EG)冷冻小鼠发育不同阶段胚胎， 将1．8M EG冷冻保存的胚胎解冻后直接移入培养液培养，探讨常用的冷冻傈护剂(乙二 醇)的适宜浓度、平衡时间、简单的解冻方法、胚胎冷冻一懈冻后的形态变化和发育能力。 实验结果表明： 1．应用1．8MEG冷冻小鼠致密晚期桑椹胚可获得较高的囊胚发育率和囊胚孵出率 (80．83％、75．O％)。 平JJ致密早删桑椹胚。 3小鼠胚胎在EG冷冻保护液中的平衡时间保持在5～15min即可。 4．应用冷冻保护剂时，分步(浓度由低到高)处理胚胎，冷冻一解冻后可获得较高 的胚胎存活力。 5在冷冻保护液中可以添加、也可以不添加蔗糖(以O～0．1M为宜)．对胚胎发 育率的影响差异不显著。 冻胚胎的效果更好(P0．05)。