我国嗜热弯曲菌cr和核酸探针检测方法的建立与应用.pdf

我国嗜热弯曲菌PcR和核酸探针检测方法的建立及应用 摘要 空肠弯曲菌和结肠弯曲菌是我国主要的嗜热弯曲菌，可以引起人和动物发生 多种疾病，并且是食物源性病原菌，在一定范围上所引起的食源性细菌感染已超 过沙门氏菌，成为在腹泻病人中最常分离到病原菌，对禽类产品安令和人类健康 造成了严重的威胁。目前，嗜热弯曲菌已成为我国进出口禽类产品检测的主要痫 原菌之一。 在出入境检验检疫中，样品中的病原菌检验，按现行标准(GB国家标准和 SN行业标准)，然而传统方法中难免有操作繁琐、步骤多、检验周期长的问题， 不能满足大批样品检验检疫的需要是对外贸易的一个急待解决的制约因素。 本研究建立了检测我国嗜热弯曲菌的PcR和核酸探针检测方法，简化了检 验流程、提高检测效率，并应用于实际样品的检测。选择空肠／结肠弯曲菌同源 性较高的16SrRNA为扩增目的基因，应用Primer5o软件设计引物，建立快速检 测鸡肉中空肠／结肠弯曲菌的PCR方法。PCR循环参数为：94℃预变性4fnin、 最佳反应条件为：模板lo‘3倍稀释，引物最佳浓度为O．4¨mol／L，MgCl2最佳浓 度为1，Ommol几。该方法能够特异性的扩增出空肠／结肠弯曲菌287bp核苷酸片 段，而对胎儿弯曲菌、金黄色葡萄球菌