小鼠ⅰi基因的隆、表达及其抗体制备.pdf

中文摘要 恒定链(invariant 子的伴侣蛋白，在抗原呈提通路中起着重要作用：(1)辅助MHC—II类分子合成； 作为MHC．II类分子内化信号，调节其分选／内化。研究表明，Ii还与CD4+T细胞及 B细胞的分化、成熟有很大关系。为探索Ii在免疫应答中的功能及其作用机理，本 研究进行了小鼠Ii基因的克隆、原核表达及其多克隆抗体的制备。 克隆酶切位点设计了一对上下游引物P1、P2，通过反转录-聚合酶链式反应技术，从 小鼠脾脏组织总RNA中扩增出一条特异性基因片段，经HindIH单酶切鉴定，与 GenBank中登录的小鼠Ii基因序列含有相同的单酶切位点。然后将该基因片段插入 I、 Sal I双酶切鉴定，筛选出阳性克隆进行DNA序列测定。结果表明本实验成功克隆 因仅有一个核苷酸的差异，同源性为99．8％，所编码氨基酸序列均完全相同。 其次，把经鉴定构建成功的重组质粒pGEX．4T-1．Ii转化到大肠杆菌BL21中， 经1．0mm01／L 果表明，所克隆得到基因片段在大肠杆菌BL21中获得有效表达，表达产物主要是 以包涵体形式存在的融合蛋白GST-