抗肝特异表达蛋lfire-1hfrep-1单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用.pdfVIP

摘要 摘要 肝细胞癌是原发性肝癌的主要类型，它的发病率及死亡率都很高，因此，对肝细胞 癌的基础和临床研究以及探索更有效的诊断治疗方法显得尤为重要。单克隆抗体技术是 现代生命科学研究的重要工具，在基因和蛋白质的结构和功能研究方面有着不可或缺的 作用，同时也在肿瘤基础研究、临床诊断和治疗中得到了广泛应用。本研究制备了两株 1／HFREP一1的功能研究提供实验用检测工具，其研究过程及结果如下： 分离血清，并建立间接ELISA检测方法为接下来的杂交瘤细胞筛选作准备。结果显示． 最适抗原包被浓度为Igg／m1．血清最适稀释度为1：6400。 显示．阳性率为89％。应用有限稀释法3次亚克隆并以Westernblot进一步验证，最终 筛选得到两株特异分泌LFIRE一1／HFREP一1抗体的杂交瘤细胞株，分别定名为LF：。“、 LFm．。杂交瘤细胞株腹腔注射小鼠，体内诱生腹水，腹水单抗通过ProteinG-argarose 柱纯化。利用SDS—PAGE、ELISA等检测方法对所获单抗进行特性鉴定．结果表明：两株 单抗L 抗效价均达1×10 7，Lhn．单抗的相对亲和力大于LF一。单抗的相对亲和力。