山羊卵泡刺激素因的克隆、序列分析及表达载体构建.pdf

摘要 当前畜牧业生产中所使用的卵泡刺激素(FSH)产品都是从牛、羊、猪等家畜的脑 垂体中直接提取的，由于材料来源有限、纯度差且常有其它激素的污染，影响了FSH的 广泛应用。用基因工程方法可大量生产高纯度的FSH，降低生产费用，这对畜牧业生产 具有重要意义。 本试验是从新屠宰的母山羊脑垂体中提取总RNA，反转录获得cDNA，以此cDNA 为模板，PCR扩增目的基因片段，分别获得长为360bp的山羊FSH-a亚基DNA片段和 长为390bp的山羊FSH．B亚基DNA片段，与预期的目的基因片8L大d,—致。将它们分 了在同一种内，甚至在所有的哺乳动物中FSH．a亚基是极为保守的；而FSH—B亚基尽 管具有种属特异性，但也是相当保守的。将所得的山羊FSH-a、B亚基基因分别用加相 18-T连接，筛选出阳性重组 应限制性内切酶酶切位点的引物大量扩增，回收后与pMD 子，大量双酶切回收获得带粘性末端的山羊FSH．a、B亚基基因，将它们分别与同两个 酶大量双酶切回收获得的带粘性末端的PF质粒进行连接，筛选阳性重组子。依此方法 载体庐sH-a—B-PF、dFSH—o-gFSHB，PF。户7一 本研究首次进行了山