本地毛形线虫4ku es重组蛋白单克隆抗体的制备与鉴定.pdfVIP

摘要 旋毛虫病是一种严重的人兽共患寄生虫病，其分布几乎遍及全球各地。该病不仅 严重危害人体健康，而且还给畜牧业及食品工业带来重大的经济损失，所以及时准确 的诊断并治疗旋毛虫病显得至关重要。 鉴于旋毛虫病的危害性，研制敏感性高，特异性强的旋毛虫病诊断试剂和保护性 高的基因工程抗体，对于防治旋毛虫病有重要的实际意义。本研究选用pET-30a表达 载体表达本地毛形线虫49kuES抗原，利用杂交瘤技术制各单克隆抗体，为建立检测 旋毛虫循环抗原方法和旋毛虫病早期诊断试剂盒及基因工程抗体的研制提供理想、必 备的试验材料。 利用本地毛形线虫491mES重组蛋白免疫Balb／C小鼠，取小鼠脾细胞与骨髓瘤细 胞融合，筛选分泌高滴度McAb杂交瘤细胞株，制各腹水进行纯化。采用间接ELISA 方法测定杂交瘤细胞上清液和小鼠腹水效价；用Southern 的SBA blot试验检测单克隆抗体的特异性：间接ELISA方法检测单克隆抗体与日本血吸虫成 虫抗原、猪囊尾蚴囊液抗原、猪蛔虫抗原、猪鞭虫抗原是否存在交叉反应。结果表明： 获得两株抗ES49kuES重组蛋白杂交瘤细胞株，分别命名为D5和C1；两株杂交瘤细 胞上清液和腹水效价均达到1：1280和1：12800；均能稳定分泌敏感性强高、特异性强高