《第05章酶与其他生物催化剂》.ppt

第 五 章酶与其他生物催化剂 酶的研究简史 公元前两千多年，我国已有酿酒记载。 1833年， Anselme Payen提纯了麦芽淀粉糖化酶（淀粉酶）。 1878年，Wilhelm Kühne首次提出Enzyme一词。 1894年， Emil Fischer证明了酶的专一性，酶与底物之间作用的锁钥关系。 1897年，Buchner兄弟用不含细胞的酵母提取液，实现了发酵。 1913年，Leonor Michaelis和Maud Menten推导出酶反应的动力学方程式。 1926~1930年，James Sumner和John H. Northrop分别将脲酶和胃蛋白酶、胰蛋白酶制成结晶，确定了酶的蛋白质本质。 1941年，George Beadle和Edward Tatum的“一个基因一个酶”假说首次将蛋白质与基因联系在一起，推动了生物化学与遗传学的结合。 1982年，Cech首次发现RNA也具有酶的催化活性，提出核酶(ribozyme)的概念。 1995年，Jack W. Szostak研究室首先报道了具有DNA连接酶活性DNA片段，称为脱氧核酶(deoxyribozyme)。 第一节 酶和酶反应简介 Introduction to Enzymes and Enzymatic Reactions 一级反应（first-order reaction）:单底物反应 二级反应（second-order reaction） ：双底物反应 胰凝乳蛋白酶的亲核催化、共价催化和酸-碱催化机制 2．稳态的概念介入米氏方程式的推导过程 稳态：是指ES的生成速率与分解速率相等，即 [ES]恒定。 k1 ([Et]－[ES]) [S]＝k2 [ES] + k3 [ES] 五、酶的活性依赖于反应系统的pH 最适pH (optimum pH)： 酶催化活性最大时的环境pH。 体内酶的最适pH多在6.5～8之间。 胃蛋白酶的最适pH为1.8 精氨酸酶的最适pH为9.8 pH对几种酶活性的影响 六、激活剂可加速酶促反应速率 酶的激活剂（activator） 使酶从无活性变为有活性或使酶活性增加的物质 必需激活剂（essential activator） 为酶促反应所必需，如缺乏则测不到酶的活性。 Mg2+为己糖激酶的必需激活剂 非必需激活剂（non-essential activator） 可以提高酶的催化活性，但不是必需的。 Cl-对唾液淀粉酶的激活作用 七、酶活性可被许多抑制剂可逆地或不可逆地抑制 （一）可逆性抑制剂与酶非共价结合 酶的抑制剂(inhibitor) 凡能使酶的催化活性下降而不引起酶蛋白变性的物质称为酶的抑制剂。 区别于酶的变性 抑制剂对酶有一定选择性 引起变性的因素对酶没有选择性 可逆性抑制（reversible inhibition） 酶与抑制剂非共价结合，可以通过透析、超滤或稀释等物理方法将抑制剂除去，恢复酶的催化活性。 不可逆性抑制（irreversible inhibition） 与酶共价结合，不能通过透析、超滤或稀释等方法将其除去。 可逆性抑制剂 一类抑制剂与酶的调节部位结合，使酶发生变构，从而对酶发挥抑制作用（别构抑制作用）。 一类抑制剂通过与游离酶或/和酶-底物复合物可逆地结合而影响酶的催化活性。 k 1 k 2 k 3 + k i E I I + S + E S E S E + P E S I + I k i 可逆性抑制作用的抑制剂可以与游离酶结合，形成二元复合物EI；也可以与ES结合，形成三元复合物ESI。 1．竞争性抑制剂与底物竞争酶的活性中心 定义： 抑制剂与底物的结构相似或部分相似，能与底物竞争酶的活性中心，从而阻碍酶-底物复合物的形成，使酶的活性降低。这种抑制作用称为竞争性抑制作用。 + + + E E S I ES EI E P 有竞争性抑制剂存在的米氏方程式 V = V m a x [ S ] K m + [ S ] ( 1 + [ I ] k i ) 双倒数方程式是 V m a x K m [ S ] V 1 = 1 V m a x 1 + ( 1 + [ I ] k i ) 反应模式 + E + S ES E + P I EI k i k 1 k 2 k 3 S I 竞争性抑制作用V对[S]的双倒数作图 * 特点 抑制程度取决于抑制剂与酶的相对亲和力及底物浓度； I与S结构类似，或部分相似，竞争酶的活性中心； 动力学特点：Vmax不变，表观Km增大。 [I] 1 V 1 [S] 0 K