micror-1反义寡核苷酸对人大肠癌ht-29细胞生长抑制作用及化放疗敏感性的影响.pdf

摘要 摘要 目的： 达对大肠癌细胞生物学行为及化放疗敏感性的影响。探讨miR一21成为大肠癌靶 向治疗的新靶点的可能性。 方法： 构建含miR．21反义寡核苷酸的慢病毒载体，通过慢病毒感染将mi艮2lAS0 细胞内miR-21表达差异，验证经转染慢病毒载体后，实验组miR-21表达下调， 再筛选出稳定转染细胞株进行后续各实验以研究下调HT-29细胞内miR．21表达 后其生物学行为的变化以及对放化疗敏感性的影响。即通过细胞直接计数法检 测各组细胞增殖情况，应用流式细胞术检测各组细胞细胞周期变化及细胞凋亡 率是否有差异，通过细胞克隆形成实验收集各组细胞克隆形成率来分析细胞克 隆形成情况，Transwetl侵袭实验检测细胞侵袭能力，MTT法检测不同梯度药物 浓度的肿瘤抑制率，以及经总量10GyX线照射后各组肿瘤细胞的生长抑制率。 结果： miR．21表达无明显差异。 2、通过细胞直接计数法连续7天分别计数各组细胞数目，绘制细胞生长曲 线，HT-29／ASO组细胞增殖速率相较于其他各对照组细胞明显更低，(P值 0．01)，而Control组、NC组、U6组各组间无显著差异。 3、流式细胞仪检测结果显示转染miR．21ASO后细胞早期凋亡率较对照组 明显增加，G0／G1期所占细胞总数百分比上升，而S期细胞百分比下降。 4、细胞克隆形成实验显示HT-29／ASO组细胞克隆形成率明显低于HT-29 Il 摘要 HT-29／U6组之间细胞克隆形成率无显著差异。 5、细胞侵袭实验显示转染miR．21ASO的实验组细胞侵袭能力明显低于对 转染慢病毒Control组无明显差异(P值0．05)。 在不同5．FU药物浓度下，HT-29／ASO转染组细胞的生长抑制率较各对照组细胞 倍数为2．35倍。 7、MTT法检测下调miR．21后HT-29细胞对放疗敏感性实验，结果显示， HT-29／U6组，而各对照组间无明显差异。 结论： 减弱，凋亡增加，对化放疗敏感性增强。miR一21可能在大肠癌的生长、侵袭、 转移及化放疗敏感性中均发挥着抑制癌细胞发展的作用，有可能成为大肠癌治 疗的新靶点。 关键词：慢病毒载体；miR一21ASO；HT-29肠癌细胞；增殖；凋亡：侵袭；放化 疗敏感性；新靶点 Abstract ABSTRACT objective： Toobservelentivirus-mediatedmiR一21 antisensenucleofidechainlowered HT-29cells howto the behaviorof colorectalcancer express impactbiological and and miR一21 colorectalcancercells radiotherapychemotherapysensitiVity．Discuss tobecomeanew forthe ofcolorectalcancer target possibility targetedtherapy． Methods： MicroRNA一21 was PCRandclonedinto genomicsequenceamplifiedby LentiviralvectorconstructwithmiR一21 antisense chainandviral oligonucleotideby transfectioninhibitionofmiR-21functionand the