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HMGBI在电离辐射损伤中的作用与相关机制研究 摘要 摘 要 目前，越来越多的基因被发现参与了电离辐射损伤，同时也发现电离辐射损 伤可以引起机体一些细胞因子、酶类和基因表达的改变，而一些分子的改变与机 体的损伤程度和辐射剂量相关。研究基因在电离辐射损伤中的作用，针对这些基 因的特性，运用生物学手段改变机体对电离辐射的效应成为放射医学领域研究的 热点之一。 HMGBl是一种存在于真核生物细胞内的非组蛋白染色体结合蛋白，目前被认 为是一种危险相关分子模式分子，在细胞的生存和死亡过程中发挥了重要的调节 作用。本课题研究了细胞和机体接受电离辐射后HMGBl的变化，HMGBl在电离 辐射损伤中的作用及其相关机制，以及通过RNAi抑制HMGBl的表达对细胞辐射 敏感性的影响及机制。旨在寻找新的放射损伤生物标志物和深入探讨电离辐射损 伤机理，为进一步拓展电离辐射在医学和生命科学中的应用范围和辐射防护损伤 救治提供实验依据。 本课题实验共分三个部分。 第一部分电离辐射诱导HMGBl的转位和释放 研究了电离辐射诱导细胞HMGBl的转位和释放，以及释放的HMGBl的剂量 和时间效应，为后续研究HMGBl在电离辐射损伤中的作用和机制奠定基础。 blot观察GM细胞和1 6MV-X射 采用免疫荧光和Western 6HBE细胞受到8Gy blot检测12种 线照射后24h细胞核和细胞浆中HMGBl的表达情况。用Western 细胞受到不同电离辐射后24h培养液中HMGBl的变化情况，以及细胞接受6Gy 照射后不同时间HMGBl的变化情况。采用ELISA监测在体动物受到电离辐射后 外周血HMGBl对照射剂量和照后时间的变化情况，最后对正常人体和接受放疗 的肿瘤患者血清中HMGBl的含量进行了初步分析。 结果显示：(1)当接受8Gy 核内HMGBl向胞浆转移。12种细胞在没有电离辐射时细胞培养液中几乎没有或 者有很少量的HMGBl蛋白，随着剂量的增加，培养液中HMGBl含量也逐渐升 摘要HMGBl在电离辐射损伤中的作用与相关机制研究 6MV-X射线照射后细胞培养液中HMGBl含 高，呈剂量依赖性；细胞在接受6Gy 量随观察时间的延长而增加，具有时间累积效应。(2)SD大鼠在没有接受电离辐 6MV-X射线全 大鼠外周血HMGBl含量随剂量的升高而增加。SD大鼠接受6Gy 之后又有所下降，至照射后7d仍然高于照射前水平。(3)正常人外周血中HMGBl 值之间无统计学意义。 第二部分细胞外HMGBl在电离辐射损伤中的作用及其信号通路研究 研究了细胞外HMGBl是否参与了电离辐射损伤?并对相关机制进行了初步 探讨。 射条件培养基(ICM)，采用这种培养基分别培养未照射的GM细胞和16HBE细胞， 以观察细胞的存活率和DNA双链断裂情况，了解照射导致释放至细胞外的 HMGBl对细胞的损伤情况。同时，加入抗HMGBl抗体中和条件培养基中的 剂丙酮酸乙酯(EP)处理细胞和小鼠，观察电离辐射对细胞和小鼠的损伤情况。 采用免疫共沉淀技术研究HMGBl和受体蛋白RAGE的结合情况，Westernblot检 测HMGBl发挥电离辐射损伤因子的细胞内相关通路上磷酸化的ERK和JNK蛋白 ’ 表达情况。 照射后细胞存活率均下降，当照射后即刻加入抗HMGBl抗体，其存活率回升， foei 抗体后，可以减少GM细胞和16HBE细胞在接受4Gy照射后细胞核中，／-H2AX 胞核中1／-H2AX lI HMGBI在电离辐射损伤中的作用与相关机制研究