hsp70l1物功能的初步研究.pdfVIP

摘要 摘 要 HSP70L1(HSP70．1ike protein 基，理论分子量54．8kDa，不含跨膜区和信号肽，与鼠HSP70的同源性达90．5％， 表面受体CD9I、TLR2、TLR4相互作用，促进DC细胞成熟并分泌炎症因子。 HSP70L1作为多肽免疫佐剂，与表位多肽交联或者融合表达后，促进DC细胞成熟 T 并分泌细胞因子，激发多肽特异性的Thl反应和CTL(cytotoxiclymphocyte)反 应，抑制肿瘤细胞生长或抵抗病毒的攻击。HSP70L1与MPPl1形成稳定的复合物， 组成哺乳动物细胞的核糖体相关复合物(ribosome．associated complex，RAC)，结 合新生肽促进其正确折叠、从核糖体肽合成通道转运出来、避免肽链后退影响肽链 的延伸，同时可以清除聚集在核糖体中的蛋白。作为一个新发现的蛋白，HSP70L1 除作为免疫佐剂和核糖体相关复合物组成蛋白之外，其他生物功能尚不清楚。 用GST-HSP70L 1免疫新西兰大耳白兔获得抗血清，用His．HSP70L1亲和纯化抗血 在不同细胞中的蛋白表达水平，结果发现在蛋白水平上HSP70L1在K562细胞中的 表达量最高，且提示其能够形成二聚体，通过免疫共沉淀实验证实该蛋白在细胞内 RNAi 的载体，转染K562细胞、Hela细胞后用G418进行压力筛选，建立HSP70L1 稳定细胞系。然后用MTT法比较野生株与RNAi稳定细胞株的增殖，发现RNAi 稳定细胞株比野生株显著性的减慢，提示HSP70L1在细胞内支持细胞增殖。为了 胞同步化在G1期后，观察细胞的周期进程，发现RNAi稳定细胞株的G1／S，G2／M 转化明显落后于野生株细胞。CDC2被蛋白激酶w色e1和Mytl磷酸化14位苏氨酸 去磷酸化作用激活CDC2--CyclinB复合物，促进细胞有丝分裂。与野生株相比， CDC2／CDC25C，免疫沉淀实验发现HSP70L1与CDC25C相互作用，而不与CDC2 的活性，促进细胞周期进程，从而影响细胞增殖。当细胞发生DNA损伤时，细胞 HSP70L1的生物功能研究 启动“DNA损伤检查点调控”机制使细胞发生G2／M期阻滞，这个过程受到CDC2 RNAi稳定 活性的调节。用DNA损伤试剂CDDP刺激细胞，发现在Hela／HSP70L1 细胞株出现明显G2／M期阻滞，提示HSP70L1参与细胞周期的检查点调控。用 RNAi稳定细胞株 Transwell研究肿瘤细胞的体外侵袭能力，发现的Hela／HSP70L1 侵袭能力较比野生株显著增强，说明HSP70L1抑制细胞的侵袭能力。用多西紫杉 胞，发现HSP70L1敲低后细胞对DNA损伤诱导的细胞凋亡同样显著性增加，这些 结果提示HSP70L1参与细胞的凋亡过程，该功能可能受非受体酪氨酸激酶c．Abl 调控。 leukemia c．abl(cellular-Abelsongene)是Abelson鼠白血病病毒(murinevirus) v．abl原癌基因在细胞内的同源基因，广泛表达于哺乳动物各组织中。c．Abl的C端有 三个核定位信号，一个核输出信号，故C．Abl可以在细胞核和细胞质问穿梭，c．Abl 的核定位影响细胞的功能。向细胞中导入针对c．Abl的反义RNA或敲除细胞中的c．Abl 会显著提前细胞进入S期的时间；在过量表达的情况下，c—Abl会导致成纤维细胞滞留 与p73的同源寡聚区结合，磷酸化p73的99位酪氨酸，刺激p73介导的转录活性和凋亡 作用。总之C．Abl在正常生理条件及病理条件下具有多种生物功