gata转录因对心肌能量代谢及细胞增殖的调控机制研究.pdf

摘要 GATA转录因子对心肌能量代谢及细胞增殖的 调控机制研究 博士研究生：姚春霞 导 师：臧明玺 郑州大学基础医学院河南省郑州市450001 摘要 研究背景与目的： 心脏具有生成ATP的巨大潜能以满足对能量的高度需求。在胚胎时期及心 肌肥大发生时，心脏主要依赖葡萄糖和乳糖作为底物产生ATP，而在出生后及成 人心脏则主要依赖脂肪酸作为底物产生ATP而获得能量。由于心肌的脂质和葡 萄糖储存能力有限，因此，它们作为底物的选择及ATP的生成是受到快速调节 的，以迅速适应心脏的能量需求。 这一调节过程涉及到多种基因不同时间的先后表达和相互作用，它们形成一 个有序的网络。该调节网络包括大量的，在时间和空间上极为精确的一系列分子 事件。在这个过程中，哪怕是极微小的错误都将导致心肌能量代谢障碍的发生， 而心肌能量代谢障碍，如线粒体脂肪酸氧化活性的降低，造成ATP产量减少， 将会导致心泵功能、收缩功能及钙离子的转运功能等失调，从而诱发心肌肥大和 心力衰竭等。因此，深入研究心肌能量代谢关键基因的调控机制，将有助于从分 子水平阐明心血管疾病的分子机理和病理学基础，同时也可为心血管疾病的临 床防治和新药设计提供更多线索。 那么，涉及心肌能量代谢的关键基因有什么呢?Glut4是调节心肌能量代谢 的一个基因，它是葡萄糖转运蛋白家族的成员，维持着机体葡萄糖的内稳态平衡。 Glut4的表达具有组织特异性并受到激素调节，Glut4基因敲除小鼠出现心肌肥 大症状。因此，Glut4是调节心肌能量代谢的关键基因之一。鉴于此，Glut4作 摘要 为心肌能量代谢的关键基因，其表达的降低或上调，对于心肌能量代谢的调节具 有重要的生理或病理意义，所以研究其调控机制，是心血管分子生物学领域的重 要课题。 那么，参与心肌能量代谢的转录因子有哪些呢?过氧化物酶体增殖物激活受 activated 体(peroxisomeproliferator receptors，PPARs)是调节编码脂肪酸B一氧 化相关酶类基因的重要转录因子，它包含三种异形体：PPARa、P呐和 在心肌细胞中的表达更为丰富。研究表明，心脏特异性过表达PPARa将诱导与 脂肪酸利用有关的基因表达，进而增强心脏脂肪酸的利用和氧化：PPARS／p基因 敲除小鼠严重地损害心肌脂肪酸氧化相关基因的表达，增加心脏脂肪酸堆积，从 而诱发脂毒性。因此，PPARs在调节心肌能量代谢中发挥着重要作用。 GATA蛋白是具有锌指结构的转录因子，因其识别序列(朋)GATA(A／G) 而得名。在该家族6个成员中，GATA4和GATA6是近年来心血管领域的研究热 点。大量的研究证明GATA4和GATA6是调控心脏发育以及心肌细胞增殖、分 化和凋亡的重要转录因子。但它们是否在心肌能量代谢中发挥调控作用，目前知 之甚少。 过转录后机制调控靶基因的表达。近年来的研究表明miRNAs是心脏基因转录调 而对细胞的表型产生影响，目前还鲜有报道。 因此，本课题以GATA转录因子为中心，采用多种方法深入研究了GATA6、 PPARa、miR-200b以及GATA4对心肌能量代谢和细胞增殖的调控机制。 研究方法与结果： 第一部分：转录因子GATA6招募PPARa协同激活Glut4基因的表达 为进一步了解GATA家族对心肌能量代谢的调控作用，采用了瞬时转染、 Blot、ColP、GST Q-PCR、荧光素酶报告基因、Western pull—down和Chm等实 能够招募核受体PPARa至葡萄糖转运蛋白Glut4启动子的GATA元件上，这种 招募能够进一步激活Glut4基因的表达，并且伴随着线粒体功能的促进及葡萄糖 利用的增加。 Western ¨ 摘要 能够刺激Glut4基