hsf1在sv0t抗原引起细胞恶性转化中的作用及分子机制.pdf

摘要 Hsfl在SV40T抗原引起细胞恶性转化中的作用 及分子机制 博士研究生 蒋杞英 导 师 马远方 郑州大学基础医学院 郑州450052 摘要 背景 热休克转录因子1(1leatshock factor transcription1，Hsfl)是热休克因子家族 有保守的DNA结合结构域，能够识别并且与位于靶基因启动子区域的热休克元 或其他应激条件下，失活的Hsfl高度磷酸化，Hsfl被激活并移位至细胞核，转 shock 变成三聚体与HSE结合，可刺激热休克蛋白(Heat proteins，HSPs)的转 录。Hsfl介导的热休克反应不仅保护细胞免受环境或细胞内应激引起的损伤， 而且涉及到对许多病理过程的调节，如炎症和肿瘤的形成。众多研究表明，在肿 瘤形成和发展的调节过程中，Hsfl起了非常重要的作用，例如，Hsfl和其相关 的下游靶蛋白(如HSPs)在大多数癌组织中是增高的。Hsfl敲除能够抑制DMBA 诱导的皮肤癌、p53突变诱导的淋巴瘤和DEN诱导的肝细胞癌，抑制HSP90分 子伴侣的活性能够诱导肿瘤细胞的凋亡。这些证据表明，Hsfl和其调节的热休 克反应能够稳定快速增殖的肿瘤细胞。 虽然，已经发现Hsfl与p53和Ras癌基因诱导的肿瘤形成有关，而Hsfl在 病毒性癌基因诱导形成肿瘤中的作用还不清楚。SV40是双链的DNA肿瘤病毒， 已经从H1V阳性的非何杰金氏淋巴瘤病人组织中分离出来。SV40能够表达两种 常被用作转基因肿瘤鼠模型和用于转化细胞的体外研究。T-ag通过与p53和Rb 相互作用和灭活肿瘤抑制因子p53和Rb的活性，能够使很多种细胞发生转化。 摘要 本课题中我们研究Hsfl在SV40T-ag转化鼠胚胎成纤维细胞中的作用。结果 构建的Hsfl导入MEF／Hsfl士细胞)在裸鼠能够形成成纤维细胞瘤，但是 慢。结果表明，Hsfl参与了刺激SV40T-ag转化细胞的增生。进一步研究表明， Hsfl缺失导致p53和I曲蛋白的蓄积，这可能与MEF／Hsfl士细胞生长的慢有关。 引起肿瘤的形成是通过调控p53和Rb蛋白的表达。 目的 1．观察Hsfl表达的缺失在SV40T-ag诱导肿瘤形成中的作用。 的表达引起。 方法 Phoenix细胞，转染后48d时，收 细胞系。质粒pWZL．blast-Flag-hsfl瞬时转染293 集含有病毒颗粒的上清，感染SV40T-ag转化的M咖sn斗细胞。选用含3ug／ml 因的表达。 2．通过体外细胞克隆形成实验，MTr实验，流式细胞术，裸鼠皮下移植瘤实验 殖和肿瘤的形成。 瘤血管形成中是否有作用。 或p53的相互作用。 Ⅱ 摘要 镗里 当日木 1．重建MEF／HsfllHsn细胞系 为了避免WT／MEF细胞和MEF／Hsfl士细胞之间同胎仔畜的差异，我们用逆转 系。通过western 达。 2．Hsfl的缺失抑制MEF／Hsfl4细胞的增生 WT／MEF细胞和MEF／Hsfl一佃sfl细胞之间没有明显差异(Ttest。胗0．05)。细胞 克隆实验结果证实，MEF／Hsfl斗细胞形成的克隆明显比WT／MEF细胞和 的百分数明显低于MEFAIsfl斗细胞(Ttest，P0．01)；但是，在S期和G2／M期， 殖。 3．Hsfl的缺失能够抑制MEF细胞形成裸鼠成纤维细胞瘤的生长 为了探讨Hsfl在肿瘤形成中是否有作用，将三种MEF细胞系接种到裸鼠皮 下。在接种裸鼠26天后，三种MEF细胞系都能形成肿瘤。然而，WT／MEF细胞和 肺转移灶，而MEF