hpv e6e增强elf4e转录表达促进宫颈癌的增殖和迁移.pdfVIP

中文摘要 【目的】 eIF4E是新近发现的原癌基因，在过表达时通过增强众多癌基因的翻译表 达促进多种肿瘤的增殖和转移。卸}VE6／E7是宫颈癌的源头癌基因。eIF4E在宫 颈癌中表达显著增高，但其机制不清楚。E6／E7对e肼E的表达影响至今未见 研究报道。本实验研究E6／E7对eIF4E转录表达的调控作用，以及这种作用对 宫颈癌细胞增殖、细胞周期、凋亡及迁移的影响，阐明eIF4E在宫颈癌中过表 达及E6厄7致癌的新机制。为进一步研究宫颈癌诊断和治疗的新靶点提供实验 依据。 【方法】 1．以宫颈慢性炎为对照，CINI、CINII—m、宫颈浸润癌为宫颈肿瘤的演进模 型，病变程度依次由轻到重。 I 2．病例：宫颈慢性炎21例、CIN25例、宫颈上皮内瘤变CINII．Ⅲ31例、宫 颈鳞癌(SCC)21例。 3．免疫组织化学方法检测上述标本的em4E，c．myC，M枷P9的表达情况，分别 分析eIF4E表达与c-myc，舳9表达的相关性。 eIF4E+)并评价转染效率。 后用Real-thmPCR和RT-PCR检测E6／E7mRNA水平，筛选高效的sllI斟A质 粒。 PCR和 及Tr触swell板等分别检测Hela细胞增殖、细胞周期、凋亡以及迁移能力的改 变。 小时后通过RT．PCR检测E6／E7和e巧4E ln】5ⅢA的表达情况，并采用CCK-8法 及TranSwell板等分别检测C一33A细胞增殖活性以及迁移能力的改变。 9．实验资料统计运用统计学软件Spssl7．0分别进行卡方检验、Sp锄锄相关性 分析以及多组间差异性的单因素方差分析(one．wayANoVA)等统计学处理。 【结果】 1．以宫颈慢性炎，CIN (25／31)，100％(21／21)。 是O．450，c．myC与MMP9的表达相关系数是O．636。 3．Ⅷ)V18 要。 E7shI℃NA2为85％；E7sllRNA3为 E6删A3为81％：E7sllI矾Al为32％； 34％；以E6删触l和E7渊A2的抑制效率最高，满足本实验要求。 5．E6sl：lRN∞I在转染48小时后对eIF4E 在转染48小时后对eIF4EnlRNA的抑制率为73％；卸F4E蛋白表达水平随其 m黜怆水平改变而改变。 低，细胞凋亡率明显增加以及细胞迁移能力减弱。 7．HPVl6 E6／E7显著表达，同时 E6／E7表达质粒转染C．33A细胞，m，V16 eIF4E的mRNA转录表达水平显著提高。 【结论】 高，表明eIF4E、c．myc、MMP9的表达与宫颈癌的发生发展密切相关。 2 测dF4E通过增强c．myC和MMP9的翻译表达来促进宫颈鳞癌的发生发展。 3．肿V18E6／E7 sⅪmA可有效沉默Hela细胞的E6／E7基因。 4．HPV E6或者E7均可以增强eIF4E的转录表达，依据是HPVl8E6／E7沉默显著 抑制eIF4EnlRNA和蛋白表达，而HPvl6E6／E7基因转染表达可增强eIF4E的转录 表达。据文献检索，这是首次发现HPVE6／E7调控eIF4E的转录表达。 5．mV E6／E7增强eIF4E基因的表达促进宫颈癌细胞的增殖、细胞周期进程和 迁移，抑制凋亡。 【关键词】 宫颈癌； E6；E7；真核细胞翻译起始因子(eIF4E) 3 Abstract 【objective】 eIF4Eisa discoVcred recently oncogene．When tra璐htioml other t0iIlcre勰e