cd133分子脑胶质瘤细胞生物学行为的作用研究.pdf

指导小组成员 葛彦博士 居颂光副教授 2 CD133 分子对脑胶质瘤细胞生物学行为的作用研究 中文摘要 中文摘要 肿瘤干细胞是指在肿瘤中组织少量存在的一群具有自我更新和分化潜能的肿 瘤细胞。先后急性髓性白血病、乳腺癌、脑癌、肠癌、黑色素瘤等多种肿瘤中发 现了肿瘤干细胞，该细胞亚群是肿瘤发生、复发、转移的根源，为肿瘤的诊断和 治疗提供了新靶点。 脑胶质瘤是颅内常见的肿瘤类型，恶性程度高、术后易复发、病人预后差。 2003 年，Singh 等首次发现了脑瘤干细胞，并将CD133 分子作为脑瘤干细胞特异 性的标志分子。此后，诸多研究表明CD133+脑胶质瘤干细胞与肿瘤的分级预后、 血管形成、高度耐药性、放/化疗耐受等许多恶性行为有关，但CD133 分子具体的 生物学功能和作用机制还有待深入研究。 鉴此，本研究通过基因转染的方法构建了一株稳定表达CD133 分子的脑胶质 瘤细胞株，并对其生长、细胞周期、神经球形成、干细胞相关基因表达、裸鼠体 内致瘤性等生物学性质进行了分析。 第一部分 人CD133 基因转染脑胶质瘤细胞株的建立 【目的】构建稳定表达人CD133 分子的脑胶质瘤细胞株。 【方法】构建含人CD133 全长cDNA 的逆转录病毒表达载体，采用脂质体法 将重组质粒及其辅助载体导入293T 细胞包装逆转录病毒，进而感染脑胶质瘤细胞 株U251 ，zeocin 加压筛选，流式细胞术、细胞免疫化学及Real Time PCR 检测CD133 分子的表达；同时构建pEGZ-Term 空载体转染的对照细胞株U251-mock 。 【结果】成功构建高表达CD133 分子的脑胶质瘤细胞株U251-CD133 。 【结论】成功构建了高表达CD133 分子的脑胶质瘤细胞株，为CD133 分子的 生 物学作用研究提供了良好工具。 I 中文摘要 CD133 分子对脑胶质瘤细胞生物学行为的作用研究 第二部分 CD133 分子转染对脑胶质瘤 细胞生物学行为的作用研究 【目的】研究CD133 分子对脑胶质瘤细胞的增殖、迁移、细胞周期、干细胞 相关基因的表达、体内致瘤性等生物学特性的影响。 【方法】以第一部分构建的U251-CD133 及U251-mock 细胞株为研究模型， 利用细胞计数、神经球形成实验及PI 染色法检测CD133 分子对脑胶质瘤细胞在体 外增殖、神经球形成能力及细胞周期的影响；Real Time PCR 检测CD133 基因转染 细胞株干细胞相关基因的表达；裸鼠皮下成瘤法检测CD133 分子对脑胶质瘤细胞 的体内致瘤性的影响。 【结果】(1) 在有血清培养条件下，人CD133 分子对脑胶质瘤细胞株U251 的 细胞增殖并无影响；但在无血清神经干细胞培养条件下可以促进脑胶质瘤细胞神 经球的形成；(2) 与对照组相比，CD133 基因转染细胞株S 期细胞比例明显增加； (3) CD133 分子促进脑胶质瘤细胞株不同程度上调干细胞相关基因的表达；(4) CD133 分子可明显增强脑胶质瘤细胞的体内致瘤性。 【结论】初步研究表明CD133 分子促进脑胶质瘤细胞株进入S 期；促进脑胶 质瘤细胞上调干细胞相关基因的表达，增强脑胶质瘤细胞的神经球形成能力和体 内致瘤性。 【关键词】CD133 ；脑胶质瘤；干细胞相关基因；基因转染；致瘤性 作 者：马晓花 指导老师：张学光 II CD133 分子对脑胶质瘤细胞生物学行为的作用研究