htertpua基因联合作用对mcf-7细胞增殖抑制和凋亡的研究.pdf

ror缨7魁8黼89揪2㈣45 hTERT／n，MA基因联合作用对McFj 增殖抑制和凋亡的研究 ， 摘要 目的：构建人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因RNA干扰表达载 体，同时构建p53上调凋亡调控因子(PUMA)的促表达载体，探讨 凋亡效应，为肿瘤联合基因治疗提供实验依据。方法：设计针对hTERT 524．1544)， 合成具有该靶序列短发夹结构的寡核苷酸，经退火形成双链DNA， 用T4 DNA连接酶连接到线性化pYr-2．1质粒U6启动子下游，构建 DH5a，经摇菌扩增，抽捉纯化质粒，通过酶切及测序鉴定确定重组 质粒构建成功。同法构建不针对任何基因的阴性对照质粒。另合成 PUMA基因的表达序列克隆至pUC57载体上，构建表达载体 BamH I和EcoRI酶切，T4DNA连接酶连接，构建重组质粒 经酶切鉴定确认重组质粒 pYr-adshuttle．1一PUMA， 转染前一日接种于6