neuriti诱导后的骨髓源性神经元样细胞的功能检测.pdfVIP

摘 要 目的： 1. 利用已构建的Neuritin酵母表达系统大量诱导表达Neuritin蛋白，并进行纯 化及鉴定； 2. 对Neuritin诱导的骨髓源性神经元样细胞进行功能检测，明确Neuritin对骨 髓基质细胞（MSCs）的定向分化的作用。 方法： 1. Neuritin蛋白的诱导表达及纯化鉴定：采用甲醇诱导毕赤酵母表达Neuritin 蛋白，采取硫酸铵饱和沉淀、Ni-NAT亲和层析、透析、浓缩等步骤对表达产 物进行纯化，SDS和Westrern blot鉴定产物； 2. 对Neuritin诱导的骨髓源性神经元样细胞进行功能检测：（1）诱导后的神经 元样细胞的电生理检测：采用膜片钳技术观察分化前后的膜特性变化以及膜 离子通道的情况。 （2）诱导后的神经元样细胞分泌神经递质的检测：用薄 层层析法检测神经递质5-羟色胺。（3）诱导后的神经元样细胞的细胞间突触 联系的检测，利用免疫荧光染色检测突触素。 结果： 1. 诱导表达的Neuritin蛋白经纯化鉴定显示：人Neuritin酵母表达产物的分子 量约为11Kda左右；经Western-blot证实为Neuritin，且具有一定的免疫活性。 2. Neuritin诱导的骨髓源性神