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Real-time PCR 检测感染宿主血清日本血吸虫DNA 水平动态变化及其在血吸虫病诊断和疗效考核中的意义 中文摘要 中文摘要 第一部分 日本血吸虫Taqman real-time qPCR 法的建立 目的：建立一种灵敏、高效的日本血吸虫Taqman real-time PCR 定量检测法， 并评价其特异性与敏感性。 方法：以日本血吸虫高度重复基因SjR2 为靶序列设计引物和Taqman 探针， 收集日本血吸虫、曼氏血吸虫、肝吸虫、旋毛虫以及肺吸虫成虫，并抽提不同成 虫模板，将普通PCR 扩增的日本血吸虫SjR2 产物纯化克隆，用real-time PCR 法 进行扩增。 结果：曼氏血吸虫、肝吸虫、旋毛虫、肺吸虫成虫模板扩增曲线均在阈值水 平以下，只有日本血吸虫扩增曲线在阈值线以上，并呈指数状分布。将以上各样 本扩增产物进行2%琼脂糖凝胶电泳，只有日本血吸虫泳道出现77 bp特异性目的条 带；将日本血吸虫SjR2基因重组质粒连续10倍稀释11个梯度，可检测到质粒最小 浓度为4.47×10 copies /μl，其标准曲线回归方程y = -3.0987x + 49.158，相关系数为 0.9965 。 结论