薄层干柱精要.pptVIP

4．1 干柱色谱 该方法是将干的吸附剂装入色谱柱中。将待分离的样品配成浓溶液或吸附于少量填料上，然后上样。当洗脱液依靠毛细作用从柱上流下，接近色谱柱底部时(图4．1)，停止洗脱，将吸附剂根据柱上各色带挖出或切开，用适当的溶剂洗出。 在该方法中，实际上没有洗脱液从色谱柱流出，色带明显分开(Loev和Snader，1965)。干柱色谱所需时间短(一般为15～30min)，且消耗溶剂很少。 当使用氧化铝(有时用硅胶)时，可利用具有相同吸附剂的分析型薄层色谱来推测柱分离的效果。该方法实际上只是制备型薄层色谱形式上的变化。二者具有相同的分辨能力，但是，干柱色谱上样量的比值却可高出许多。在使用薄层色谱时，样品与吸附剂的比例约为1：500；对于干柱色谱，可采用1：300或1：500的比例；对于易分离的混合物，甚至可使用1：100的比例(Loev和Good—man。1967)。先利用薄层色谱选择最佳的溶剂系统，然后进行干柱色谱分离，但需注意先将吸附剂适当失活(Loev和Goodman，1967)。在使用硅胶为吸附剂进行分离时，可在硅胶中掺入15％的水使之失活。使用混合溶剂系统进行干柱色谱分离时，可能达不到分析型薄层色谱所显示的分辨能力，这时可在装柱前用10％的流动相对干柱的吸附剂进行预饱和(Engel—brecht和Weinberger，1977)。 当洗脱液将干柱展开后，需去除色谱柱的支撑物，其中最容易去除的支撑物是塑料柱(如尼龙)。可根据展开的色带用刀将色谱柱或管切成若干段，然后把被分开的化合物用溶剂提取并进行过滤(Loev和GoodnlaFl，1967)。尼龙柱的另一优点是可在紫外灯下观测到无色的色带，以此可指导切割。然而欲将吸附剂紧密平整地装入尼龙管并不容易，因此，人们更倾向于使用玻璃柱色谱，在进行分离后将吸附剂推出或用刮刀顺序地将色带刮出。 为了方便地取出被分开的色带，J．T．Baker推荐一种“高分辨制备型组件”(preparative high resolution seg。ment，PHS)装置，它由一定数量的玻璃或石英组件构成，在不锈钢罩内，各组件通过玻璃接口彼此联接(图4．2)。用上行方式展开色谱柱。当分离结束后，可轻易地将各组件分开，从而方便地取出内容物。色谱分离最好选用直径为40μm左右的固定相，其中还可加入20％的硅藻土以加快分离速度，并可采用不同直径及长度的色谱柱。 干柱色谱比常用的常压柱色谱 具有更好的分辨能力。Loev和Goodman(1967)曾用2m长的氧化铝干柱分离过50g的样品，然而，这种应用实例并不多见。更常见的 Beveridge等(1988)介绍了一种更易于操作的湿法装柱法，它有更好的重现性，并可使用碱性溶剂系统。这种色谱柱的制备方法是将薄层用硅胶60GF254(Merck公司)与柱体积等同的溶剂混匀倒入一端塞有棉花的玻璃管内。随着溶剂的流出，硅胶不断沉积下来，直至溶剂仅够覆盖硅胶表面为止。然后将吸附于少量硅胶上的样品加在柱上，开始进行洗脱至有样品流到色谱柱底部为止。这时移去棉花，用柱塞将柱内吸附剂推出，在紫外灯下检测各组分，并根据需要将吸附剂切割。可将根据薄层色谱所确定的溶剂条件直接用于柱色谱分离，但丙醇或丁醇一类流速慢的溶剂系统并不适用。 减压干柱色谱是干柱色谱的一种改进方法。在该方法中，采用水泵减压将溶剂从柱色谱中抽出，有关这方面的介绍可参考有关文献(Leopold，1982)。 操作是采用洗脱式的干柱色谱分离。在该方法中，样品被加到装有干填料的色谱柱上面，然后用流动相进行洗脱。 干柱色谱比常用的常压柱色谱 具有更好的分辨能力。Loev和Goodman(1967)曾用2m长的氧化铝干柱分离过50g的样品，然而，这种应用实例并不多见。更常见的 Beveridge等(1988)介绍了一种更易于操作的湿法装柱法，它有更好的重现性，并可使用碱性溶剂系统。这种色谱柱的制备方法是将薄层用硅胶60GF254(Merck公司)与柱体积等同的溶剂混匀倒入一端塞有棉花的玻璃管内。随着溶剂的流出，硅胶不断沉积下来，直至溶剂仅够覆盖硅胶表面为止。然后将吸附于少量硅胶上的样品加在柱上，开始进行洗脱至有样品流到色谱柱底部为止。这时移去棉花，用柱塞将柱内吸附剂推出，在紫外灯下检测各组分，并根据需要将吸附剂切割。可将根据薄层色谱所确定的溶剂条件直接用于柱色谱分离，但丙醇或丁醇一类流速慢的溶剂系统并不适用。 减压干柱色谱是干柱色谱的一种改进方法。在该方法中，采用水泵减压将溶剂从柱色谱中抽出，有关这方面的介绍可参考有关文献(Leopold，1982)。 操作是采用洗脱式的干柱色谱分离。在该方法中，样品被加到装有干填料的色谱柱上面，然后用流动相进行洗脱。 干柱色谱比常用的常压柱色谱