葡萄卷叶伴随3型病毒与葡萄A病毒的多重检测及其系统进化分析.pdfVIP

园 艺 学 报 2011 ，38 （12）：2401 –2410 http: // www. ahs. ac. cn Acta Horticulturae Sinica E-mail: yuanyixuebao@126.com 葡萄卷叶伴随 3 型病毒和葡萄 A 病毒的多重检 测及其系统进化分析 1,2,3 4 2 2 1 1,* 王建辉 ，刘建军 ，陈克玲 ，李洪雯 ，席德慧 ，林宏辉 1 2 （生物资源和生态环境教育部重点实验室，四川大学生命科学学院，成都 610064 ； 四川省农业科学院园艺研究所， 3 4 成都 610066 ； 农业部西南地区园艺作物生物学与种质创制重点实验室，成都 610066 ； 四川省农业科学院，成都 610066 ） 摘 要：葡萄卷叶伴随 3 型病毒（Grapevine leafroll associated virus-3，GLRaV-3 ）和葡萄 A 病毒 （Grapevine virus A，GVA ）常常复合侵染部分主栽欧美杂交葡萄品种。以半定量RT-PCR 与 qRT-PCR 方 法研究了‘希姆劳特’葡萄（Vitis vinifera L. × V. labrusca L. ‘Himrod ’）中不同组织内病毒的相对积累量， 结果表明叶脉和韧皮部内的病毒相对积累量显著高于其他组织。以成熟枝条韧皮部组织的 cDNA 为模板， 优化了 RT-PCR 多重扩增体系，可以同时扩增待测样本中两种病毒的目标基因。从一株复合感染 GLRaV-3 与 GVA 的‘藤稔’葡萄（Vitis vinifera L. × V. labrusca L. ‘Fujiminori ’）中，分别克隆了GLRaV-3 外壳蛋 白（coat protein，CP ）基因全长序列和GVA 部分基因组区域序列，后者包括 CP 基因的部分序列与病毒 RNA 沉默抑制子（viral suppressor of RNA silencing ，VSR）基因全长序列。病毒核酸同源性分析与系统进 化研究表明，不同 GLRaV-3 分离物的 CP 高度保守；而‘藤稔’葡萄的 GVA 分离物包含多种变异株，具 有准种病毒的特点。 关键词：葡萄；葡萄卷叶伴随 3 型病毒；葡萄 A 病毒；病毒外壳蛋白基因；病毒 RNA 沉默抑制子基 因；RT-PCR 多重检测；病毒变异株 中图分类号：S 663.1；S 436 文献标识码：A 文章编号：0513-353X （2011 ）12-2401-10 Optimizing Multiple Detection and Phylogenetic Studies on Grapevine leafroll associated virus-3 and Grapevine virus A 1,2,3 4 2 2 1 1,* WANG Jian-hui ，LIU Jian-jun ，CHEN Ke-ling ，LI Hong-wen ，XI De-hui ，and LIN Hong-hui 1 （Key Laboratory of Bio-resource