检测动物棘球蚴3种PCR方法比较.pdfVIP

·148· 垦匾医堂量生虫痘盘盍垫!!生!旦筮!!鲞筮i翅堕!』丛鲤坠塑吐望i!：丛业垫!!，!尘：塑，№：i ·论著· 检测动物棘球蚴的3种PCR方法的比较 周正斌朱淮民’ 【摘要1 目的比较多重PCR(multiplexPCR)、PCR-限制性片段长度多态性(PCR．RFLP)、半巢式 PCR等3种检测棘球蚴的PCR方法，优化可区分多房棘球绦虫、细粒棘球绦虫羊株(Gl型)和骆驼株 (G6型)、石渠棘球绦虫和带科绦虫的方法。方法 根据细粒棘球绦虫、多房棘球绦虫、石渠棘球绦 虫、带科绦虫线粒体基因序列，用DNAStar软件设计半巢式PCR通用引物，建立半巢式PCR法，并与文 献报道的多重PCR法、PCR．RFLP平行扩增3份巨颈绦虫囊尾蚴、48份多房棘球蚴、8份细粒棘球蚴样 本DNA，比较3种检测方法的特异性和灵敏度，并以细粒棘球蚴组织DNA为模板测定3种方法的灵敏 度。 结果半巢式PCR法灵敏度最高，59份样本全部扩增出561 bp条带，但需要测序才能确定虫种； 多重PCR法能扩增出3份巨颈绦虫囊尾蚴(带绦虫)样本(3／3，100％)，5份(5／8，62．5％)细粒棘球蚴 样本，23份(23／48，47．9％)多房棘球蚴样本，其余28份样本为假阴性；PCR—RFLP扩增细粒棘球蚴、多 房棘球蚴和巨颈绦虫囊尾蚴(带科绦虫)的阳性率与多重PCR相同，且PCR-RFLP不能区分细粒棘球绦 虫Gl型和带科绦虫。统计学分析显示半巢式PCR法的棘球蚴检出率高于PCR—RFLP法和多重PCR 法。半巢式PCR法灵敏度分别是PCR—RFLP法和多重PCR法的1000倍和100倍，最低检出细粒棘球 蚴DNA浓度为253ps／m。 结论根据不同研究目的，可组合选用多重PCR法、PCR—RFLP法、半巢式 PCR法区分细粒棘球绦虫G1型、G6型，多房棘球绦虫，石渠棘球绦虫和带绦虫。 【关键词】棘球蚴；聚合酶链反应；虫种鉴别 of3PCRmethotisfordetectionofEchinOCOCCilSanimalsZHOU Comparison spp．in Zheng—bin．zHU Medical Huai—min’．DepartmentofPathogenicBiology，SecondMilitary University，Shanghai200433，China ‘Correspondingauthor：ZHUHuai．min，Email：hmzhu@hotmail．corn theChineseNational and Supportedby ProgramforDiseasefromthe胁胁竹ofScienceTechnology Key Infectious (2008zxiO004旬n、 To 3 PCRand 【Abstract】Objectlve methods(hemi—nested PCR—RFLP)， compare PcR，multiplex and method Echinococcus tlle fordisefiminationof animals．MethodsHemi．nestedPCR optimize spp．in were totIlemitcchondriaDNA oftheGenusEchinococcuswithDNAStar primersdesignedaccording sequence inclu