酱油中霉菌酵母菌计数检测(二)要点.pptVIP

酱油中霉菌和酵母菌计数检测(二) 回忆： 1、什么是霉菌？霉菌易在什么环境下生长？ 2、酵母菌的菌落有哪些特点？ 霉菌： 霉菌是在培养基上长成绒毛状、棉絮状或蜘蛛网状的真菌。 霉菌喜好在相对温度较低，湿度较高的环境中生长。 酵母菌： 酵母菌属于真菌，单细胞个体较大，菌落成圆形，边缘光滑，菌落个体与细菌菌落形状类似但个头较大。 工作任务 实训目的 1、掌握霉菌酵母菌梯度稀释和接种操作手法 2、能够区分霉菌酵母菌与细菌总数梯度稀释 和接种方法差异 3、掌握霉菌酵母菌计数检测中梯度稀释和倾 注法接种中的无菌操作要点 仪器和设备 吸量管1mL 4支，25mL1支，带有225mL无菌水的三角瓶1只，带有9mL无菌水的试管3只，吸耳球，酒精灯，记号笔，样品原液。 预热到45度左右的马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基，培养皿4个，电炉或电热套。 培养箱。 任务一：培养基制备 马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基制备 配方： 马铃薯（去皮切块） 150g 葡萄糖 10.0g 琼脂 10.0g 氯霉素 0.05g 蒸馏水 500mL 制法： 将马铃薯去皮切块，加500mL蒸馏水煮沸10-20min。用纱布过滤，补加蒸馏水至500mL。 加入葡萄糖和琼脂，加热熔化，分装后，121度灭菌20分钟。倾注平板前，用少量乙醇溶解氯霉素加入培养基中。 任务二：梯度稀释和接种 梯度稀释和倾注法接种： 1、吸取25mL液体样品或称取25g固体样品，无菌操作法加入225mL无菌水中，摇匀制备成1：10样品溶液。 用1mL无菌吸量管吸取1：10样品溶液，用无菌方法各取1mL，分别加入到2个无菌培养皿中。 2、换一只无菌吸量管吸取1mL1：10样品溶液，加入到装有9mL无菌试管中反复吹吸，制备成1：100样品溶液。用这支吸量管各取1mL1：100溶液，加入到2个培养皿中。 3、再换一只无菌吸量管吸取1mL1：100样品溶液，加入到装有9mL无菌试管中反复吹吸，制备成1：1000样品溶液。用这支吸量管各取1mL1：1000溶液，加入到2个培养皿中。 4、再换一只无菌吸量管，吸取1mL空白溶液，加入到无菌培养皿中。 5、将预热到45度左右的马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基加入15-20mL到装有1：10、1：100、1：1000和空白的培养皿中，混匀冷却，倒置培养28度，5天后观察。 1、样品的稀释 固体和半固体样品：称取25g样品至盛有225ml灭菌蒸馏水的锥形瓶中，充分振摇，即为 1:10充分稀释液。 或放入盛有225ml 无菌蒸馏水的均质袋中，用拍击式均质器拍打2min，制成1:10的样品匀液。 液体样品：以无菌吸管吸取25ml样品至盛有225ml无菌蒸馏水的锥形瓶（可在瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。 取1ml1:10稀释液注入含有9ml无菌水的试管中， 另换一只1ml无菌吸管反复吹吸，此液为1：100稀释液。 按上述操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1次1ml无菌吸管 2、接种 根据对样品污染状况的估计，选择2个~3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10倍递增稀释的同时，每个稀释度分别吸取1ml样品匀液于2个无菌平皿内。同时分别取1ml样品稀释液加入2个无菌平皿作空白对照。 及时将 15ml~20ml 冷却至 46℃的马铃薯—葡萄糖—琼脂或孟加拉红培养基（可放置于46℃±1℃恒温水浴箱中保温）倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。 国家标准介绍 目前使用标准： 中华人民共和国国家标准 GB4789.15—2010 食品安全国家标准 食品微生物学检验 霉菌和酵母计数 适用范围： 本标准规定了食品中霉菌和酵母菌 的计数方法。 本标准适用与各类食品中霉菌和酵母的计数。 检测流程 操作步骤 1、 样品的稀释 固体和半固体样品： 称取25g样品至盛有225ml灭菌蒸馏水的锥形瓶中，充分振摇，即为 1:10充分稀释液。或放入盛有225ml 无菌蒸馏水的均质袋中，用拍击式均质器拍打2min，制成1:10的样品匀液。 液体样品： 以无菌吸管吸取25ml样品至盛有225ml无菌蒸馏水的锥形瓶（可在瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。 取1ml1:10稀释液