第8章 外源化学物致癌作用精要.ppt

烷化剂、PAHs、芳香胺类化学物、氨基偶氮染料、亚硝胺类化合物、黄曲霉毒素、植物毒素和金属致癌物等八大类。 * * * * * * 对培养细胞诱发与肿瘤形成有关的表型改变。此种表型改变是因致癌物所致核型改变的结果，其改变包括细胞形态、细胞生长能力、生化表型等变化，以及移植于动物体内能形成肿瘤的能力。 * * 目前恶性转化试验可按所用的细胞分为三类： 1、原代细胞：常用叙利亚仓鼠胚体细胞（SHE细胞）、人类成纤维细胞、小鼠皮肤或大鼠支气管上皮细胞等； 2、细胞系； 3、病毒感染细胞：常用RLV/RE细胞即劳舍尔白血病病毒感染的Fisher大鼠胚体细胞和SA7/SHE细胞即猿猴腺病毒感染的SHE细胞。 人类癌症约70%来自于上皮细胞，发展上皮细胞特别是在人体上皮细胞的转化试验具有实际的意义。 * * 本试验的观察终点是恶性变的细胞 * * * * 其可靠性超过致突变试验，但仍存在假阳性和假阴性问题。 由于肝和肺是最常见的发生肿瘤器官，也是许多化学致癌物的靶器官，因此新化学物致癌性的筛查常选用这两个试验。 * * 小鼠皮肤肿瘤诱发试验适用于煤、石油和烟草的焦油以及其中所含的多环芳烃，还有许多直接致癌物如硫芥、氮芥、双氯甲醚和丙环内醋等。 * * 进行这些试验时，除特定要求外，应遵从长期动物致癌试验的一般要求。 由于实验期短，又未检查其他器官和系统，特别是皮肤肿瘤和乳腺癌的诱发试验一般仅适用于较小范围的化学物质类型，所以哺乳动物短期致短试验阴性结果的意义较差。 * * 哺乳动物长期致癌试验又称哺乳动物终生试验，是目前公认的确证动物致癌物的经典力法，较为可靠。化学致癌的一个最大特点是潜献期长，在啮齿动物进行1-2年的试验即相当于人类大半生时间。如果用流行病学调查方法验证一种新化学物的致癌性，一般需要人类接触受试物20年后才能进行。此外，动物试验能严掐控制实验条件，而流行病学调查不易排除混杂因素的影响。 * * 动物使用数量大，高剂量暴露，暴露途径的限制 * * 代谢方式与人的类似性 选择动物最重要的依据是对诱发肿瘤的易感性。除考虑物种、品系、年龄和性别、自发肿瘤率较低外，选择具有特定靶器官的物种尤为重要。小鼠对肝肿瘤的易感性与大鼠相近，但肝癌自发率较高，易患各种肝脏疾病。新生动物比年龄稍大者对致癌和一般毒性敏感，但易患其他感染疾病，死亡率较高。实验的动物多使用断乳或断乳不久的动物。性别一般是雌雄各半，除非已证明该受试物结构近似的致癌物有易感性性别差异，才选择易感的性别。为避免假阴性，每组动物数较一般毒性试验为多。如当对照肿瘤自发率为1%，而染毒组肿瘤发生率为20%时，每组动物需要40只才能有90%的把握度为阳性。如自发率上升为10%，每组动物需214只；或肿瘤发生率下降为10%，则每组动物需114只。所以一般提出每组最少50只动物是指当对照组肿瘤自发率为1%、5%、10%、20%或30%时，染毒约肿瘤发生率应相应为20%、30%、40%、50%或60%才有0.9以上的把握度获得阳性结果。 啮齿类动物对多数致癌物易感性较高，寿命相对较短，费用也较低，在致癌试验中使用最广泛。常用的是大鼠和小鼠，也可用仓鼠。为避免动物种属敏感性的差异影响评价的结果，一般主张用两种物种进行试验。 * * 长期致癌试验多为经口和经呼吸道接触染毒，选择何种途径要根据受试物的理化特性和对人有代表性的接触方式，给受试物的频率按所选择的给予途径和方式可以有所不同。如果受试物是通过胃肠道吸收的则最好选用口服途径。把受试物混入饲料中、溶于饮水中，或用管饲法连续给予动物。混入饲料中的受试物的最高浓度不应超过5%。较理想的应是每周7天均给予受试物，然而根据实际工作方便考虑，每周给5天的方式仍是可行的，但是中断染毒可使动物得到恢复或毒性缓解，从而影响结果及以后的评价。经呼吸道接触染毒每日接触时间，依试验要求而定，工业毒物的试验通常每日吸入4-6小时，环境污染物一般要求每日吸人8小时或更长时间。 * * 经皮，涂敷面积不少于总面积的10，接触良好，防止舔食，每天涂敷一次，每周3-7次 为观察到剂量反应关系一般使用三个剂量。较低剂量为前一级较高剂量的1/3至1/4，最低剂量最好相当于或低于人类实际可能接触的剂量。最高剂量应尽可能加大，但又不致死，这样才不至于漏检致癌物。美国国家癌症研究院(NCI)推荐的最高剂量为最大耐受剂量（MTD）。理想的MTD非但不应致死，也应不缩短寿命，与对照组相比，体重下降不大于10%。因此，必须通过预试来设计一个估计的最大耐受量（EMTD）。根据急性试验的LD50，设计14天亚急性试验，以确定亚急性MTD；之后再设计90天的亚慢性试验，确定亚慢性MTD，然后选择稍低剂量作为终生试验的EMTD。原则上实验期限要求长期或终生。不同物种寿命长短不一，观察时间要