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内源酶对WSSV检测干扰的消除及榆测方法的研究 内源酶对WSSV检测干扰的消除及检测方法的研究 摘要 对虾白斑综合症病毒(WSSV)病的持续暴发是阻碍养虾业发展的主要因豢之 一，到目前为止尚没有非常有效的治疗措旋，因而建立快速、准确、简便的检测 技术显得尤为重要。 厂 (在用免疫酶方法检测过程中我们注意到健康对虾假阳性结果的出现。经过分 析认为对虾内源碱性磷酸酶和过氧化物酶是导致假阳性结果的内在原因。例如， 在斑点免疫试验中，对虾体内的过氧化物酶可以与底物3—3、一二氨基联苯胺四虢 酸盐(DAB)反应．使其氧化产生棕褐色产物，出现与标记第二抗体的辣根过氧化 物酶特异性发色相同的颜色。同样，对虾体内的碱性磷酸酶和标记第二抗体的碱 性磷酸酶具有同源性，能与底物氯化硝基四氮唑蓝和5一溴一4氯一3一吲哚一磷酸 两种对虾内源酶的活性。为了证明对虾体内的碱性磷酸酶和过氧化物酶是造成免 疫酶检测方法中假阳性结果的内在原因，我们采取与斑点免疫吸附实验相同的步 骤，不加第一抗体和第二抗体，直接显色观察，用不同的温度、pH值、叠氮钠 化物酶的活性。在进一步的实验中，运用酶标仪测定给出数掘来判断各种试剂的 进行了不同浓度、不同处理时问