单链抗体637人血清白蛋白融合蛋白的真核表达及功能鉴定.pdfVIP

延边人譬仉m’I．物’?+0廿“!I譬伯沦t t摘幔 单链抗体637与人血清白蛋白融合蛋白 的真核表达及功能鉴定 摘 要 目的：将已绛卡f=『缱的霞癌u儿九力抗乙酰Ijll碱受体主耍免疫原区单链抗体637 融合蛋白的分子量，检测融合蛋门与人肋MH儿乙酰肌碱受体的亲和性。方法：将 携带有重组塾因表达载体的毕赤酵母菌GSIl5菌株复苏后，利用抗生素G．418 筛选高拷贝重组子．用YPD培养基传代培养．再经BMGY、BMMY表达培养 基培养3天，每24小时添加100％甲醇使甲醇终浓度为1％诱导表达。培养基 000 上清液室温经14 g离心后，利用斑点杂交试验(dotbIot)仞步判定上清液中 的融合蛋白；采用十』二．：烷琏硫酸钠一聚丙烯酰股凝胶电泳(SDS．PAGE)分析融 合蛋白的分予量：应用M接免疫荧光技术确定融合蛋白与人肋I．日J肌乙酰月H碱受体 KD．I．日j 的亲和性。结果：培养牲f=f；