慢病毒肌肉注射导人fⅷ基因在大鼠体内的表达.pdfVIP

慢病毒肌肉注射介导人FvIII基因在大鼠体内的表达 研究生：于爽 指导教师：金昱 摘要 目的本研究制备携带人凝血因子vIII(hFvIII)基因的重组慢病毒，并肌 肉注射到J下常大鼠股四头肌，观察体内的表达。 方法将含hFvIII基因的慢病毒载体与包装质粒cMv△R8．74、包膜质粒 VSV-G转染产毒细胞293T细胞，以制备包含EP0cDNA的重组慢病毒。将制备 好的重组馒病毒感染HeLa细胞，检测培养上清中llFvlII的表达量；直接肌肉注 射J下常大鼠后，检测血浆中IlFVIIJ抗原浓度和抗体。取注射部位组织中提取DNA 进行PCR。 组慢病毒(1×108IU／m1)直接肌肉注射到J下常大鼠后血清中可检测到高水平的 l周最高达(133．1士5．6)BU／ml，持续到实验期间。除在注射部位组织外，其它主 要脏器均未观察到hFVIII基因的存在。 结论制备的重组慢病毒在培养细胞中高水平表达，肌肉注射后在币常大 鼠体内能构建并长时『日J稳定表达，为血友病A基因治疗提供理论和实验依据。 关键词： 慢病毒载体；hFvⅢ；血友病A ofFVIIIGeneCar