成年兔肌腱细胞外培养方法改进和腱细胞生物学特性的观察及尼古丁对其生长的影响.pdfVIP

摘 要 第一章成兔肌腱细胞体外培养方法改进 及腱细胞生物学特性的观察 目的：对肌腱体外培养方法进行改进，探索一种简便易行的培养 肌腱细胞的方法并观察分离培养的腱细胞的生物学特性。方法：取家 兔20只，体重1．5～2．5kg应用显微外科技术剥除屈肌腱外膜组织后， 以胰酶及胶原酶消化去除残存腱外膜组织，腱组织剪成lmm3小块， 放入50ml培养瓶中，贴壁培养。当细胞长出并融合成单层细胞后进 行传代培养，并以1000转／分速度离心淘洗10分钟，去除上层液体， 向沉淀物加入F．12完全培养液，分瓶传代培养。同时对照组采用消 化法培养。检测培养细胞的倍增时间、核分裂像并绘制肌腱细胞的生 长曲线；利用光镜和电镜观察肌腱细胞形态和结构；利用免疫细胞化 学ABC法检测培养细胞的胶原表达。结果：利用我们改进的方法培 养肌腱细胞的成功率为95％(19／20)，而消化法无成功，腱细胞自组 织块内爬出贴壁生长时问平均为12+1．7天左右，细胞倍增时间平均 为6土0．9天。光镜下见兔肌腱细胞为成纤维细胞形态，梭形，排列方 向较一致，电镜见细胞呈长梭形状，体积大，细胞核亦呈长条状，有 许多核切迹，核仁清晰可见，呈网状，常染色质丰富，有较多胞