抗tnfα抗体体外亲和力成熟.pdfVIP

摘要 抗TNFQ抗体的体外亲和力成熟 博士生汪保安 导师王琰 摘要 TNF o是炎症反应的一种主要介质，在许多疾病的病理过程中起着重要作用， 抗TNFQ抗体对这些病理过程能起拮抗作用，从而产生治疗效果。在早期工作中， a抗体的轻、重链可变区基因并在 我们曾从一株单克隆抗体杂交瘤克隆出抗TNF 大肠杆菌表达了其单链抗体(ScFv)和Fab抗体。为进一步提高其亲和力，本研 究尝试多种突变方法，利用抗体库技术，建立体外抗体亲和力成熟流程，此流程 将适用于其它工程抗体。 第一部份：随机突变提高噬菌体单链抗体的亲和力。首先对pscTNF单链抗 体基因进行两轮错配PCR，构建突变库，库容为7×106。部份克隆测序显示碱基 突变率为3．7％，氨基酸突变率为lO．6％。这些突变有37％分布于CDR区，63％分 布于骨架区。对此库进行四轮淘筛，获得了多株特异性结合克隆，有些结合能力 有所提高，但亲和力改善不明显。