海马神经元雄激膜受体的定位及其快速作用.pdfVIP

中文摘要 海马神经元雄激素膜受体的定位及其快速作用 摘 要 目的：以原代培养海马神经元为研究对象，观察睾酮．牛血清白蛋白． 神经元细胞膜雄激素特异性结合位点(膜受体)的存在；研究睾酮对原代 培养海马神经元Ca+和钙调蛋白(CaM)的快速作用，为海马神经元雄激 素膜受体介导的非基因组作用研究提供实验依据。 方法： 1、原代海马神经元培养、形态观察及鉴定：新生ld内SD大鼠乳鼠， 无菌条件下断头取脑，剥离海马，去除血管和软脑膜，剪碎海马组织，胰 养箱内孵育，培养24h内，更换培养基为含L一谷氨酰胺和2％B27的 元及其纯度。 2、海马神经元雄激素膜受体定位研究：取培养8～10天的原代海马 神经元，加入T-BSA．FITC370C作用15min，激光共聚焦显微镜下观察雄 激素复合物的亚细胞定位。BSA．FITC作为阴性对照组。另设竞争性实验， 素膜受体。 3、研究雄激素对海马神经元Ca2+的快速作用：Ca2+敏感荧光染料 T干预前后细胞内Ca2+的变化。每隔2s记录一次，共记录30min。 4、研究雄激素对海马神经元CaM的快速作用：应用免疫荧光