DNA提取及PCR解读.pptVIP

实验二：DNA提取及PCR反应 暨南大学医学院生化系 陈万群 DNA是染色体的组成成分，遗传的物质基础 研究遗传、疾病发生的基础 研究的前提：DNA的提取 目前，提取基因组DNA的方法不仅成熟而且有多种方法可供选择，如经典的酚氯仿抽提法、不同试剂公司开发的各种DNA提取试剂盒、Chelex-100法等。 具体选择何种方法要根据提取DNA所用材料的来源及特点、材料的多少、所需DNA的质量要求、提取效率等诸多因素，综合考虑最终选择适合自己或者实验室条件的方法。 一、DNA提取的基本步骤 1. 材料准备 2. 细胞裂解 3. 核酸分离、纯化： 4. 核酸沉淀、溶解 附经典的经典的酚氯仿抽提法 基本过程是在EDTA及SDS一类的去污剂及蛋白酶K等的作用下破碎细胞，消化蛋白质 酚、氯仿抽提则可去除与DNA结合的蛋白质以及多糖、脂类等生物大分子。 然后通过沉淀DNA，去除盐类、有机溶剂等杂质，达到纯化DNA的目的。 制备DNA的原则是既要将蛋白质、脂类、糖类等物质分离干净，又要保持DNA分子的完整。 EDTA可以螯合金属离子，抑制DNase的活性，防止DNA的降解。 SDS是离子型表面活性剂，主要作用是：①溶解膜蛋白而破坏细胞膜；②解聚细胞中的核蛋白；③与蛋白质结合，使蛋白质变性而沉淀下来。 蛋白酶K，广谱蛋白酶，在SDS、EDTA存在下保持很高的活性，可将蛋白降解成小的多肽