DNA序列分析解读.pptVIP

第四章DNA序列分析（DNA Sequencing) 罗建新 一．概述 二十世纪 六十年代 Sanger Brownlee创立了RNA序列测定技术 1975年 Sanger创立DNA测序方法 加减法 1977年Maxam Gilbert创立 化学降解法 80－90年代 DNA芯片技术 荧光DNA分析技术 毛细管电泳技术 DNA测序仪 二.DNA序列测定方法 加减法 末端终止法 化学降解法 毛细管电泳技术 DNA测序仪 Pyrosequencing (一)末端终止法 主要步骤 1.ssDNA模板制备 2.与测序引物退火 3.标记反应 4.引物延伸,终止反应 5.PAGE 6.Autoradiograph 7.阅读分析结果 (二) DNA 测序仪 原理 沿用Ｓａｎｇｅｒ等建立的双脱氧链末端终止法,ＤＮＡ聚合酶催化延伸反应产生的ＤＮＡ片段仍需通过序列胶电泳分离,标记为无放射性伤害的荧光标记物。荧光标记物共有4种,掺入方式有两种:一种是标记引物(5′一端标记),另一种标记ｄｄＮＴＰ(3′一端标记),反应完成后采用四标记单泳道电泳法分离ＤＮＡ,一次可读出的ＤＮＡ长度为400—500ｂｐ 九十年代,欧洲分