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Trl调节性T细胞在肝免疫耐受中的作用及机制研究 中文摘要 中文摘要 Trl调节性T细胞在肝免疫耐受中的作用及机制研究 关键词：Trl调节性T细胞；免疫耐受；IL-10；ConA 中图分类号：R3 肝的免疫耐受状态与肝脏疾病的发生和发展密切相关，它不仅可以在免疫 性肝炎中发挥作用，也可以决定感染性肝脏疾病的免疫应答程度。如严重危害 生命健康的乙肝、丙肝，由于机体免疫系统对病毒及其抗原反应低下或特异性 耐受，患者临床表现为持续病毒感染状态，肝脏长期存在慢性炎症与肝细胞增 殖性改变，最终发展为肝硬化、肝癌，若将耐受状态逆转为应答状态则可有效 清除肝炎病毒，改善疾病症状；另一方面，肝免疫耐受的成功诱导能延长移植 肝的存活，是提高生存质量的重要手段。近年来，在对自身免疫性肝炎发病机 制的研究中发现，机体在易感性基因的作用下，受环境因子、药物或感染因子 的诱导，导致肝自身免疫耐受状态削弱，产生针对肝细胞膜自身靶抗原的细胞 免疫与体液免疫反应，造成自身免疫性肝损伤。如何抑制自身免疫应答，维持 免疫耐受状态，是目前的研究热点。 调节性T细胞因其在维持机体自身免疫耐受状态中的关键作用而日益受到 重视，根据来源及功能不同，调节性T细胞可分为多个亚群，包括CD4+CD25+ 调节性T细胞、Trl(Trl Tcell，Trlceil)调节性T细胞和Th3等， regulatory 它们的功能异常是自身免疫性疾病如类风关、自身免疫性肝损伤等的重要的免 疫学发病机制，其中Trl调节性T细胞(Trl细胞)在自身免疫性疾病中的抑 制作用备受关注。Trl调节性T细胞以高分泌IL-10为主要特征，具有低增殖 性，主要通过其分泌的IL-10抑制初始和记忆性Thl和Th2的反应。另外，在 外源IL-10的刺激下初始CD4+T细胞可以被诱导为Trl调节性T细胞。已有研 究证明Trl细胞在口服和系统性全身免疫耐受中均发挥重要作用，但Trl细胞 在肝免疫耐受中的作用及其机制研究甚少。 基于此，为了阐明Trl细胞在肝脏免疫耐受中的作用，我们建立了ConA 诱导的小鼠肝免疫耐受模型，探讨Trl调节性T细胞在其中的作用及其机制， 以期为自身免疫性肝炎的治疗和维持肝移植的免疫耐受提供实验和理论依据。 第一部分ConA诱导的小鼠肝免疫耐受模型的建立 我们以亚致死剂量ConA预处理、致死剂量ConA再次攻击小鼠建立肝免 复旦大学上海医学院 硕士论文 Trl调节性T细胞在肝免疫耐受中的作用及机制研究 中文摘要 疫耐受模型。第O天，以亚致死剂量ConA预处理Balb／c小鼠，生理盐水预处 理组作为对照，第8天分别给予两组小鼠致死剂量ConA诱导小鼠急性肝损伤， 再次ConA给予8小时后检测血清转氨酶(ALT)和肝病理损伤的变化。从血 清学指标来看，ConA预处理组小鼠血清转氨酶(ALT)水平较生理盐水预处理 组小鼠显著降低；小鼠肝组织病理检查结果显示，ConA预处理组仅有极少的 炎性细胞浸润，生理盐水预处理组显示大量浸润的炎性细胞在肝组织扩散并导 致局部肝细胞坏死。因此通过以上结果证明我们成功诱导了肝免疫耐受，建立 了ConA诱导的肝免疫耐受模型。 第二部分Trl调节性T细胞在ConA诱导的肝免疫耐受模型中的作用 在成功建立ConA诱导的肝免疫耐受模型的基础上，我们聚焦在T淋巴细 胞，观察脾脏中T淋巴细胞数量和比例的变化，结果发现：与对照组相比较， 一，Foxp3一)；同时，胞内细胞因子染色检测发现Trl调节性T细胞在肝脏和脾脏 中的比例明显升高，且细胞表面高表达CD69和CD44分子，呈现活化表型， 提示处于效应状态。为了解Trl细胞亚群在抵御ConA诱导的急性肝损伤中的 作用，我们将ConA预处理组的CD4*T细胞转输正常小鼠，发现经转输具有Trl 调节性T细胞表型的ConA预处理组的CIM+T细胞的小鼠，可以抵御致死剂量 ConA的攻击：更进一步，我们以体外诱导的Ttl调节性T细胞过继转输正常 小鼠，以致死剂量ConA诱导急性肝损伤，同样发现转输Trl调节性T细胞能 显著抵御致死剂量ConA的攻击，保护肝脏免受损伤。这些结果充分提示ConA 诱导的