对正常大鼠心肌胞连接立体结构及连接蛋白表达增龄变化的研究.pdfVIP

中 文 摘 要 对正常大鼠心肌细胞连接立体结构及连接蛋白表达 增龄变化的研究 摘 要 目的:本研究应用HE染色、免疫组织化学技术、激光 共聚焦显微镜技术及消化扫描电镜技术，对胚胎、新生、幼 年、成年、中年及老年正常大鼠左心室心肌细胞闰盘的立体 构筑和连接蛋白Connexin43 Cx43 ,Connexin Cx40 , N-cadherin,a-catenin含量、分布的增龄变化进行了研究， 以期为人类心脏发育相关研究提供生物学资料。 方法:本实验选取SD大鼠胎鼠5只 孕20天 和出生 后雄性 SD大鼠，按年龄分为新生组 出生3^-5天 ，幼年 组 出生20-25天 ，体重25士4g;青年组 出生3-4月 ， 休币250士log;中年组 出生6-8月 ，体重350士log 和老年组 出生 13^15月 ，体重450士log，每组各5只。 1、选取上述 6组动物的心脏经主动脉灌流4%多聚甲醛后， 常规石蜡包埋，横断面连续系列切片，片厚5 Lm.HE染色、 免疫组织化学技术结果结合图像分析系统分别检测大鼠心 肌 Cx43,Cx4o,N-cadherin,a-catenin的表达情况，并计 量阳性表达的平均光密度值 OD/um .2,激光扫描共聚焦 显微镜技术选取青年组动物，取材方法同前，采用Cx43标 红色荧光、Cx40标绿色荧光进行荧光双重标记口3、扫描电 镜技术选取青年、中年和老年组，心脏样品取心外膜侧 0.5 X0.5X0.3cm3大小，经6N氢氧化钠水溶液 620C消化 10min，超声波处理 Imin，常规脱水、干燥、镀膜后进行扫 中 文 摘 要 描电镜观察。 结果:1,HE染色结果:胚胎组和新生组大鼠心肌细胞 呈短杆状，不形成明显的心肌纤维束，核密集;幼年组细胞 直径增大，心肌纤维逐渐向纵向生长;青年组和中年组心肌 纤维成束排列，可见明暗相间的横纹，细胞分支增多;老年 组心肌纤维排列紊乱，部分出现断裂，结缔组织增多，细胞 间隙增大。2、免疫组化结果: 1 胚胎组和新生组大鼠心 室肌的Cx43,Cx40多数呈斑点状散在分布于细胞表而和细 胞浆中，幼年大鼠心室肌的Cx43、Cx40多数聚集于两端闰 盘处，少数仍呈斑点状散在分布于细胞表面。青年、中年和 老年大鼠的 Cx43、Cx40典型地分布于胞端闰盘处。 2 N-cadherin,a-catenin在从胚胎到新生时期主要散在分布于 细胞表面，幼年时期则集中到心肌细胞端一端连接处 类似闰 盘处 ，极少数分布于侧一侧连接处，从青年到老年则稳定在 胞端闰盘处;图象分析表明:心室心肌细胞Cx43、Cx40, N-cadherin,a-catenin的表达存在增龄性变化。3,激光共 聚焦显微镜结果:在激光的激发下，心肌细胞连接处可见表 达Cx43的连接通道呈红色小短杆状免疫荧光标记，Cx40呈 绿色，当二者同时被观察时可见其重叠的部位呈黄色。4, 扫描电镜结果:青年组和中年组心肌细胞的闰盘由许多台阶 状平台构成，在这些平台上分布有细小指状突起，突起大小 均匀，且排列密集、整齐，台阶之间为平滑的细胞膜。老年 组细胞间隙增大，闰盘的突起逐渐矮小，稀疏，不均匀，排 列不整齐。 结论:1、光镜和电镜研究表明，心肌细胞从胚胎到老 年，细胞由短杆状逐渐呈长纤维状，细胞直径逐渐增大，心 中 文 摘 要 肌细胞核浆比值逐渐减小，心肌纤维排列成束，分支逐渐增 多。老年后细胞结缔组织逐渐增多，细胞间隙逐渐增大;闰 盘结构，从青年到老年，大小不等，分支闰盘逐渐增多，突 起由密集、整齐、锐利逐渐矮小、稀疏，这些变化都与心脏 的形态发育相适应。2、在大鼠心肌发育过程中，Cx43,Cx40, N-cadherin,a-catenin的表达分布存在增龄性变化，其分布 方式与闰盘的发育具有一致性，与心脏传导系统逐渐成熟具 有相关性。 关键词:Cx43;Cx40;N-cadherin;a-catenin;缝隙连 接;增龄:扫描电镜;激光共聚焦显微镜 英文摘要 Thestudyofconstructioninmousemyocadial connectionandconnectiveproteinchangingasage advancing ABSTRACT Objectives:Theagingchangesinthree-dimensional structureofmyocardialcellconnectionandchangesof Connexin43 Cx43 .Connexin4O Cx4O .N-cadherin,a-catenin expressionwerestudiedusingmeth