核酸制备的一般方法和原理.pptVIP

核酸的分离与纯化 核酸的分离与纯化 就基因工程而言，核酸分子是其研究所涉及的主要对象，所以核酸的分离与提取是研究中很重要的基本技术。 核酸样品的质量将直接关系到实验的成败。 核酸的分类 DNA 主要存在于细胞核的染色体中。核外也有少量DNA，如线粒体DNA（mtDNA），叶绿体DNA（cpDNA），质粒DNA。 RNA 存在于细胞质中，如mRNA, rRNA, tRNA等。 除上述DNA，RNA外，还有非细胞形式存在的病毒和噬菌体，其或只含DNA，或只含有RNA。 核酸制备的一般原则 分离纯化核酸总的原则： ①应保证核酸一级结构的完整性； ②排除其它分子的污染。 核酸纯化应达到的要求： ①核酸样品中不应存在对酶有抑制作用的 有机溶剂和过高浓度的金属离子； ②其它生物大分子的污染应降低到最低程度； ③排除其它核酸分子的污染。 核酸制备的一般原则 核酸制备时应注意的事项: ①尽量简化操作步骤，缩短提取过程。 ②减少化学因素对核酸的降解。PH4-10 ③减少物理因素对核酸的降解。机械剪切力和高温 ④防止核酸的生物降解。 核酸制备的一般原则 核酸制备的步骤： 破碎细胞 提取 纯化 核酸制备的一般方法和原理 核酸酶的抑制和抑制剂剂 降低温度，改变pH及盐