松材线虫鉴定方法的研究和比较.pdfVIP

第41卷第5期 南湃大学学报(自然科学版) V01．41N95 2008年l{)月 AetaScientiarumNaturaliumUniz，ersitatisNankaiensis 0Ct。2008 文章编号：0465—7942(2008)04—0043—07 松材线虫鉴定方法的研究与比较 张奇1， 羚 舞2， 张楚菁3， 李海燕4， 骂浜薅5， 蒸惠龙4， 王金成3， 马以贵3， 杨文博5， 白 钢1’5 4。灏家林韭局森林瘸墩害防治总站，辽宁沈阳110034；5．南开大学生命辩学学院，天津300071) 擒鬃：遴过形态掌溪察，鬻工酶分褥，ITS—RFLP渡及RAPD分析等方法分舅|l辩来鑫于不弱黧家稳建区的 40个线威群体进行鉴定，弗对四种分析方法进行比较．形态学观察可以初步区分松材线虫和拟松材线虫；通过 谷草转氨酶的同工酶分析，可以准确地区分上述两种线虫；基于分子生物学的ITS—RFLP分析除了可以准确地 鉴定两种线虫外，还可以对拟松材线虫的地域特征作出判断，划分为亚洲型和欧洲型；而RAPD分析不仅能准 麓建鉴定瓣耱线虫，还可敬捺述各秘橙搴|线文秘数轮嚣线虫弹蠹以及静霾豹遗抟邋纯关系． 关键蠲：松材线虫；鍪定方法；同工酶分拼；ITS—RFLP分析；RAPD努柝 中圈分类号：TQ78 文献标识码：A O 引 言 松誊|线塞病是借韵予媒介瑟虫橙福天牛(Monochamus 害松树的一种特大的毁灭性灾害，最初该瘸害主要分布予荧国、加拿大、日本等多个国家．我国于1982年 在南京中山睃附近死亡的黑松上首次发现松材线虫。随后，又相继在江苏、安徽、广东等地的局部地区以及 香港、台湾地区陆续发现．通常死树里常混生有松材线嫩(Bursaphetenchus mucronatus)，两者虽然形态极为攘似，煎致病性帮襞显零弱。松材线虫麓霉|起松树萎蔫， (Bursaphelenchus 造成大量松树死亡，而拟松材线虫却往往对松树没有致瘸性，因此在检疫上要求将两种线虫区分开来． Guiran等人c3]利用同工酶电泳分析的方法发现线虫株系在脂酶和苹果酸脱氢酶的同工酶谱带上有显著 oxaloacetic 差异，两Kiyahara等人Ho盼结果显示利用谷摹转氨酶(glutamic 这两种线虫明显鲍区分开采；Kojima等入[s3的研究结果表明，松奉砉线虫分泌的纤维素酶的谱带类型与攮 松材线虫的不同，而且有较强的分解结晶纤维素的能力．Vrain等人口1采用分子生物学乎段，设计一对特 异性引物对荧洲剑线虫(Xiphinema rDNA扩 增片段进行RFLP分折，发现所分析的所有种及种下群体阏也存在着差晃．郑经武等人D]也曾报道了松材 线蛊程撅松榜线虫的特异性RAPD指纹图谱的鉴定方法．零研究剩用采囱溪志不网缝区黻及遂ISI包装审 的40个线威群体样品，结龠本实验室的方法分别对松材线虫和拟松材线虫的形态学鉴定、同工酶分析、 ITS—RFLP以及RAPD分析等四种不同的嬷定方法进行了比较研究． 王材料与方法 l。l试剂仪器 Marker购予 试剂：援白酶K，Taq酶以及CTAB均购于上海生工，随机引物由上海生工合成，DNA 北京鼎国生物公司，其他试剂均为分析纯． 主要仪器；PCR扩增仪(2400型，PE公镯，凝胶自动成像仅(Imagemaster 器均为国产。 收稿日期：2007—05—20 基金项嗣：国家“十五”恿点科技攻关子项目 作者簿介：张奇(1979一)，男，辽宁大连人，媾士，讲师，主要从拳药学、免疫学及分子生物学研究。 万方数据 ·44· 瘫瑟大学学摄(囊然辩学叛) 繁4l卷 1．2样品来源 贝尔曼漏斗法分离线虫，根据形态学分类法通过镜检鉴定线虫的种类，并从松材线虫或拟松材线虫的禽量