第一章植物组织培养详解.pptVIP

无机氮可以两种形式供应，即硝态氮和铵态氮。有些培养基以硝态氮为主，另一些以铵态氮为主，多数二者兼而有之。 氮（N）氨基酸，维生素，蛋白质和核酸的重要组成 钙（Ca）细胞壁及细胞内信号传导途径中的重要组成 磷（P）细胞核主要组分，磷脂，核酸，酶，维生素 钾（K）促进光合，激活许多酶 镁（Mg）硫（S）影响酶的活性和方向及新陈代谢 大量元素的主要生理功能： 微量元素 浓度为10-5～10-7mol/L,稍高发生毒害， 缺少表现缺素症状。 铁（Fe）维持叶绿体功能即叶绿体的氧化还原过程 铜（Cu）可促进离体根的生长 锰（Mn）锌（Zn）钼（Mo）酶的活性组分 铁往往以无机铁供应，如硫酸亚铁，为了防止沉淀，目前皆用螯合铁，即硫酸亚铁（FeSO4）加乙二胺四乙酸钠（Na2·EDTA）配成。 微量元素的主要生理功能： 2．有机物质 主要有两类： 一是作为有机营养物质，为植物细胞提供碳、氢、氧、氮等必要元素，如糖类（蔗糖、葡萄糖和果糖）、氨基酸及其酰胺类（如甘氨酸、天门冬酰胺、谷氨酰胺） 另一类是一些生理活性物质，在植物代谢中起一定作用，如B族维生素；盐酸硫胺素（VB1）、盐酸吡哆醇（VB6）、烟酸(VB3)等，浓度一般在0.1-1.0 mg/L,还包括生物素(VH)、抗坏血酸（VC）、肌醇、单核苷酸及其碱基（如腺嘌呤等）。 3．植物生长刺激物质 主要加入植物天然的五类激素物质及其人工合成的类似生长激素物质。 生长素类：吲哚乙酸（IAA）、萘乙酸(NAA)、 2，4-二氯苯乙酸(2,4-D)、 吲哚丁酸(IBA) 吲哚乙酸（IAA）活性较低，高温高压易降解。 萘乙酸(NAA)、吲哚丁酸(IBA)活性较强，用于诱导生根，与细胞分裂素配合诱导芽。 2，4-二氯苯氯乙酸(2,4-D)、诱导愈伤组织的形成，低浓度时有利于诱导胚状体的分化形成。 配制：生长素溶于95%的酒精或0.1mol/L的NaOH中。 细胞分裂素：激动素（KT)、6-苄基腺嘌呤(6-BA)、玉米素(ZT) 6-苄基腺嘌呤激动素（6-BA）,激动素（呋喃氨基嘌呤，KT）是常用的。促进细胞的分裂和诱导不定芽的分化。 配制：细胞分裂素溶于0.5mol/L或1mol/L的盐酸。 赤霉素类中常用的： 赤霉素(GA3)。刺激器官生长，抑制器官发生，在组织培养中应用较少。 配制：赤霉素溶于水后不稳定，溶于95%的酒精，使用前过滤 4.其他附加成分 活性炭 吸附外植体释放的有害物质，如酚类，因吸附不具有选择性，也吸附有益物质，使用时要慎重，用量控制在0.5%～3%。 天然提取物 常用的有10%～20%的椰乳（CM） 100～200mg/L的水解酪蛋白（CH） 0.01%～0.05%的酵母提取物（YE） 番茄汁（TJ）及玉米胚乳等 抗生物质(antibiotic) 包括青霉素、链霉素、庆大霉素等，用量在5-20mg/L之间。添加抗生物质可防止菌类污染，减少培养中材料的损失。 5.琼脂(agar) 海藻中提取的多糖类物质，仅溶于水，温度低于40度时凝固成凝胶状。起固化培养基的作用。 琼脂粉的用量在6-10g／L之间若浓度太高，培养基就会变得很硬，营养物质难以扩散到培养的组织中去。若浓度过低，凝固性不好。 一般琼脂以颜色浅、透明度好、洁净的为上品。 凝固能力下降的因素 长时间的高温 过酸过碱 时间过久，琼脂变褐 6. 水 植物生长所需的各种营养物质均需溶于水才能被细胞吸收。 培养目的不同要求不同纯度的水 蒸馏水 大多数组织培养 去离子水 原生质体培养等要求较高的培养 自来水 大规模生产的组培化工厂 (二)培养基的种类，配方及特点 常用培养基的种类及配方 根据营养水平 含无机营养，有机化合物，糖和水 培养基 基本培养基： 完全培养基： 基本培养基+植物生长调节物质 +其他有机附加物 常用的MS,改MS,White,改White,Nitsch,N6,B5等 2.常用培养基的特点 高盐成分培养基 MS,LS,ER等，MS的钾，铵，硝酸盐的用量较大，微量元素齐全，用于愈伤组织，或用于胚、茎段、茎尖及花药培养。 硝酸钾含量较高的培养基 B5,N6,SH等 B5 适合于南洋杉，葡萄，豆科和十字花科 N6 单子叶植物，禾谷类植物的花药和花粉培养 SH 单子叶植物及双子叶植物的培养 中盐成分培养基 尼许 H，Nitsch, Miller, 培养基等 适合大豆愈伤组织培养和花药培养，更适合木本植物的组织培养 低盐成分培养基 怀特 White, Knop培养基，适合生根培养 (三)培养基的配制 1.制备母液