实验二 质粒DNA电泳鉴定 - 武汉大学药学院.pptVIP

实验二 质粒DNA电泳鉴定 生物技术制药实验 武汉大学药学院实验教学中心 生物技术实验室 主讲教师：刘永梅 刘永平 实验目的 掌握琼脂糖凝胶电泳分离DNA的原理； 学习琼脂糖凝胶电泳的操作方法 实验原理及背景知识简介 电泳是分离和纯化DNA片段的最常用技术。如DNA制备、浓度测定、目的DNA片段分离，重组子的酶切鉴定等均需要电泳完成。 根据分离的DNA大小及类型的不同，DNA电泳主要分两类： 聚丙烯酰胺凝胶电泳??适合分离1kb以下的片段，最高分辨率可达1bp，也用于分离寡核苷酸，在引物的纯化中也常用此中凝胶进行纯化，也称PAGE纯化。 琼脂糖凝胶电泳??可分离的DNA片段大小因胶浓度的不同而异，胶浓度为0.5～0.6%的凝胶可以分离的DNA片段范围为20bp～50kb。电泳结果用溴化乙锭（EB）染色后可直接在紫外下观察，并且可观察的DNA条带浓度为纳克级，而且整个过程一般1小时即可完成。由于该方法操作的简便和快速，在基因工程中较常用。 琼脂糖凝胶电泳 琼脂糖是一种线性多糖聚合物。 浓度越高，孔隙越小，其分辨能力就越强。 琼脂糖浓度(%) 线型DNA分子的分离范围(Kb) 0.3 5～60 0.6 1～20 0.7 0.8～10 0.9 0.5～7 1.2 0.9～6 1.5 0.2～3 12.0 0.1～2 分离原理 DNA分子在碱性环境中带